骨髓间充质干细胞静脉移植对脑创伤大鼠细胞自噬变化的影响

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2、已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。导师签章笠目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8研究论文骨髓间充质干细胞静脉移植对脑创伤大鼠细胞自噬变化的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯99日U百⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44综述骨髓间充质干细胞生物学特性及在脑外伤中的应用⋯⋯⋯⋯50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6

4、0中文摘要骨■间充质千细胞静臆：移檀对脑创伤大豆细胞自噬变化的影响摘要目的：利用Marmarou大鼠中度创伤性脑损伤(1BI)模型，(1)探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)是否可以向TBI损伤灶中迁移、存活，并促进TBI大鼠的神经功能功能恢复；(2)探讨骨髓间充质干细胞对TBI大鼠治疗作用的机制。方法：①实验动物及分组：健康雌性SD大鼠120只，体重280-a：209，随机分为假手术组(Sham组)、创伤模型组(TBI组)、创伤+PBS移植组(PBS组)和创伤+BMSCs移植组(BMSCs组)．每组30只。PBS和BMSCs组

5、在造模成功后24h分别经鼠尾静脉移植等体积PBS和BMSCs(3x106／m1)，其余组不做任何处理。每组均划分为移植后ld、3d、5d、7d、14d共5个时间检测点。另取40只健康雌性SD大鼠，依据上述分组，每组lO只，于移植后7d，8d和9d行Moms水迷宫测试。②骨髓问充质干细胞分离和培养：采用体外全骨髓贴壁筛选法获取5W龄雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)并培养增殖，经倒置相差显微镜观察细胞生长及形态变化。⑨大鼠中度弥漫性脑损伤模型制备：采用Marmarou方法，用重4509、直径18mm的铜棒在1．2m高度自由

6、下落击中大鼠头部，制作大鼠创伤性脑损伤(TBI)模型。④检测方法及指标：倒置相差显微镜下观察BMSC形态；每组大鼠均于相应检测点行神经功能缺损评分(NeurologicalSeverityScores，NSS)评价大鼠神经功能恢复情况，随后处死大鼠取脑，免疫荧光法检测大鼠脑内性别决定基因SRY证实BMSCs迁移到脑；HE染色光镜下观察脑组织结构及病理形态：Western—blot法检测自噬指标LC3和Beclin—l的蛋白表达量；免疫组化检测Beclin-1的免疫反应性及组织细胞定位情况；Moms水迷宫测试检测大鼠空间学习记忆

7、能力。结果：1BMSCs培养结果：体外全骨髓贴壁筛选细胞培养法结果理想，经换液传代培养约12—14d左右，细胞传至第3代，细胞融合成单层，形态单一，呈漩涡状排列，具有明显方向性。中文摘要2神经功能缺损评分结果：随着移植后时间的延长，各组大鼠一般状况逐渐好转，NSS分值逐渐减小，Sham组大鼠神经功能缺损未见异常，评分均为0分，远低于其它三组，差异具有显著性(氏O．01)；移植后ld，损伤组间NSS评分未见显著性差异(胗0．05)，移植后3d开始，BMSCs组评分低于TBI组和PBS组，差异具有显著性(P<0．05)，5d以后，

8、差异更显著(P