exendin-4对gk大鼠早期糖尿病性视网膜病变保护机制的研究

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1、後旦大学万方数据博士学位论文学校代码：学号：1024610ll1220065Exendin．4对GK大鼠早期糖尿病性视网膜病变保护机制的研究ProtectiveeffectsanditsmechanismsofExendin．．4inEarlyDiabeticRetinopathyofGKRats．导师组成系：华山医院业：眼科学名：范毅超师：叶纹教授员：顾建新教授张瑜博士完成日期：2013年3月20日院专姓导万方数据复旦盔堂盟±堂焦论塞曼墨塑鱼i卫墨墅堑煎盍鼠呈翅猹屋痘丝塑圈蹙痘銮堡芷扭剑笪班宜目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9II型糖尿病GK大鼠早期糖尿病视网膜病变模型的观察，玻璃体腔注射E4对GK大鼠DR的疗效、浓度梯度观察及GLP-1R在GK大鼠视网膜的表达情况第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22玻璃体腔注射E4对GK大鼠视网膜功能学、形态学的保护作用及分子生物学机制第三部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38玻璃体腔注射E4对GK大鼠血一视网膜屏障的

3、保护作用及其分子生物学机制第四部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53E4对高糖培养原代Huller细胞的作用及机制小结--·⋯-······”·”······”·”·”····”·”·”·”··”·”···”····”····”·”··“62参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63致谢····”·”·⋯⋯···········”··········-······”············”····”·”····”·68附录一：文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯70附录二：主要英文缩写表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯80附录三·i主要试剂和设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82附录四：论文发表及获奖情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8万方数据复旦太堂蝗±堂僮途塞基苎￡n亟i塾墨盟鱼K盔鼠呈翅蕴屋瘟焦视圈膜痘变像莛扭剑的堑窒中文摘要目的：观察玻璃体腔注射Exendin-4(E4)对II型糖尿病GotoKakizaki(GK)大鼠血糖、体重、视网膜形态学、功能学的影响。探讨Exendin．4参与II型糖尿病GK大鼠早期糖尿病视网膜病变保护作用的相关机制。方法：1．以II型糖尿病GK大鼠为糖尿病视网膜病变模型，Wistar大鼠为对照，观察GK大

5、鼠视网膜功能及形态学的变化，玻璃体腔注射Exendin．4，观察其对GK大鼠随机血糖、空腹血糖、体重等全身代谢情况的影响，以及观察其对视网膜形态学的影响。ERG检测视网膜功能的变化。蛋白免疫印迹(Westernimmunoblotting，WB)、免疫组织化学法(Immunohistochemistry，IHc)观察糖尿病大鼠视网膜组织胰升糖素样肽一1受体(Glucagon—likepeptide一1receptor，GLP一1R)的表达情况。2．观察玻璃体腔注射Exendin．4对GK大鼠视网膜细胞计数、视网膜电图(Electroretinogra

6、m，ERG)、视网膜细胞的胶质化、视网膜细胞凋亡情况的影响，同时观察其对线粒体凋亡通路的影响。3．观察玻璃体腔注射Exendin-4对GK大鼠血一视网膜屏障关键蛋白occludin，claudin一5、炎症因子ICAM—l、IL-1B，血管内皮相关因子VEGF、PIGF及血一视网膜屏障功能及相关信号调控通路的影响。4．高糖培养原代MUller细胞，观察高糖及E4对Mtlller细胞GLP一1R表达及凋亡相关信号通路因子表达情况的影响。结果：1．8周龄．16周龄GK大鼠空腹血糖、随机血糖较正常对照组Wislar大鼠有明显升高，8周龄闪光ERG．Ops波

7、振幅较Wistar大鼠有明显降低，但b波振幅相对对照组Wistar大鼠未有明显变化。12周龄GK大鼠闪光ERGb波振幅及Ops波振幅较Wistar大鼠明显降低，8周龄到16周龄b波及Ops波振幅随时间增长而逐渐降低。玻璃体腔注射E4O．1pg／eye，对视网膜功能(ERG)的保护作用最大；相对于非治疗组，GK大鼠治疗组随机血糖、空腹血糖及体重无明显特殊变化；石蜡切片免疫组化显示，16周龄时GK大鼠GLP一1R表达降低，而GK大鼠E4治疗组GLP．1R升高。2．玻璃体腔注射E4，可以减少GK大鼠视网膜(GeL、ONL、INL)各层细胞的丢失，其中对神经

8、节细胞层(GCL)、外核层(ONL)万方数据复旦太堂擅±堂焦i金塞基墨￡Ⅱdin墨盟QK丕匦呈塑蕉屋痘性视圆