jnk信号通路在白介素-1β介导人胚肺成纤维细胞增殖与活化中的作用

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1、论文题目：巡值曼通路在自佥塞二!旦佥昱厶题照盛红维绁胞缝殖皇适焦主数佳眉答辩委员会主席：史垦玲塾拯苴壑医型太堂随届j匕塞』L童匡瞳答辩委员会成员：星运壹塾援渔刿医堂医隘厘箜三医院!瞪属直墓』k重匡医奎重苤主堡湿趔医堂暄附属箜三医瞳!随厘直墓』b童匡瞳温州医学院硕士学位论文目录一、缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(2)二、中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(3)三、英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(6)四、前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(9)五、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯(12)六、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(14)七、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(21)八、分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(33)九、结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(37)十、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(38)十一、个人信息⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．(41)十二、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．(43)十三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．(44)十四、学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．(53)温州医学院硕

3、士学位论文缩略词表英文缩写英文全称中文译名2温州医学院硕士学位论文JNK信号通路在白介素一113介导人胚肺成纤维细胞增殖与活化中的作用研究生：张慧指导老师：李昌崇教授．张维溪副主任医师林立主治医师温州医学院附属第二医院、附属育英儿童医院儿童呼吸科中文摘要目的：1．研究C—Jun氨基末端激酶(JNK／SAPK)信号通路抑制剂SP600125对肺成纤维细胞增殖及磷酸化JNK蛋白表达的影响，明确其适宜的有效浓度，为后期研究作参考。2．观察在白介素(IL)．1B不同的作用时间与浓度下肺成纤维细胞JNK磷酸化水平的变化，明确其量效关系，选择适宜的有效

4、作用时间和浓度，用于后期研究。3．探讨JNK信号转导通路在IL．1p介导的人肺成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法：将MRC．5细胞株稳定传代、培养及同步化后，加入不同浓度的IL．1B(0、0．1ng／ml、1ng／ml、5ng／ml、10ng／m1)刺激1h，或用IL—lB(10ng／mL)刺激0、15min、30min、1h、2h、4h、8h、12h，使用免疫蛋白印迹法(WesternBlot)检测细胞JNK／SAPK磷酸化水平：加入不同浓度SP600125(0lamol／mL、1pmol／mL、5lmaol／mL、10pmol／mL、2

5、0Ixmol／mL、40Nmol／mL、50gmol／mL)处理30min后，CCK．8法检测细胞的增殖情况，确定适宜浓度范围，采用WesternBlot检测细胞JNK／SAPK磷酸化水平；将实验分为对照组(未干预组)、IL一10组(10ng／mLIL-16)、SP600125组(20pmol／mLSP600125+10ng／mLIL-113)，采用WesternBlot检测细胞磷酸化JNK(P．JNK)蛋白和a一平滑肌激动蛋白(a．SMA)的表达，RT-PCR检测纤溶酶原激活物抑制剂(PAl．1)、纤维连接蛋白(FN)、神经生长因子(NG

6、F)和0【一SMAmRNA的相对表达量，ELISA检测培养上清液中国家自然科学基金资助(项目编号：30973232)温州医学院硕士学位论文NGF及白介素(IL)．6的水平。结果t1．SP600125对肺成纤维细胞增殖的抑制作用CCK．8检测结果显示，d,N量．INK抑$恻SP600125不影响成纤维细胞的增殖，当浓度达至t]40州时开始明显抑制成纤维细胞的增殖。分别用1洲、5州、10州、200M、40rtM、50¨M的SP600125处理30分钟后，成纤维细胞的生长抑制率分别为(O．93±O．18)％、(0．916+0．098)％、(O．8

7、60___0．130)％、(O．8404"0．140)％、(13．910___2．O)％、(24．690±2．170)％。2．WesternBlot检测细胞JNl【磷酸化水平及n．SMA蛋白表达IL一1p促成纤维细胞JNK磷酸化的作用呈浓度依赖性增强，在0ng／ml、0．1ng／ml、lng／ml、5ng／ml、10ng／mlIL一113刺激下P．JNKIOD值分别为0．0894-0．018、O。164±0．032、0．282±0．036、0．376±0．058、0．51-4-0．069，10ng／mL时JNK磷酸化水平最高；用10ng／m

8、lIL．113刺激成纤维细胞，结果显示，在不同时问点作用下细胞P．JNK蛋白的表达存在动态变化，0min、15min、30min、lh、2h、4h、8h、12h的P．JNKIOD