橡胶草响应茉莉酸的蛋白质组学研究.pdf

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1、分类号：密级：公开学号：2015200510单位代码：10759石河子大学硕士学位论文橡胶草响应茉莉酸的蛋白质组学研究学位申请人李忠晴指导教师闫洁副教授申请学位门类级别理学硕士学科、专业名称生理学研究方向植物生长发育代谢调控所在学院生命科学学院中国·新疆·石河子2018年6月StudyoftheProteomesofTaraxacumkok-saghyzRodininresponsetoJasmonateADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartia

2、lFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofNaturalScienceByLiZhong-qing(Physiology)DissertationSupervisor:Prof.YanJieJune,2018摘要【目的】利用蛋白质组学技术中的双向电泳凝胶技术，建立橡胶草叶片蛋白质的双向电泳凝胶体系。研究外源使用茉莉酸甲酯（MeJA）对橡胶草（Taraxacumkok-saghyzRodin，TKS）蛋白质的诱导效应，比较分析处理后的蛋白质表达

3、图谱，初步探寻部分蛋白的功能，为从蛋白分子水平提供实验基础和方法指导，并为后续橡胶草其他部位的蛋白质组学及代谢蛋白质组学的研究奠定基础。【方法】通过对蛋白质样品的制备方法的筛选、上样量的确定、凝胶染色方法以及IPG胶条的pH范围等几个体系条件的优化，建立适合于橡胶草的双向电泳体系。以三月生的橡胶草叶片为材料，叶面喷施浓度为0.4mmol·L-1MeJA处理0小时和24小时后提取叶片蛋白质进行双向凝胶电泳。通过对不同处理条件下的双向电泳图谱进行比较，选择差异表达的蛋白进行质谱鉴定，分析差异蛋白的功能。【

4、结果】（1）改良TCA-丙酮法提取橡胶草叶片总蛋白是最优方法。通过用TCA-丙酮法、改良TCA-丙酮法、酚-乙酸铵沉淀法、Tris-HCl浸提法、直接提取法五种蛋白提取方法所制备的蛋白质样品，比较五种不同的提取方法对蛋白质浓度、蛋白质提取率的影响，以及SDS-PAGE图谱的分析，选择Tris-HCl浸提法、酚-乙酸铵沉淀法和改良TCA-丙酮法进行2-DE电泳。对三种不同提取方法的双向电泳效果进行比较，最终确定以改良TCA-丙酮法提取橡胶草叶片总蛋白质效果最佳，并进行进一步的双向电泳实验。（2）通过对不

5、同蛋白上样量、不同凝胶染色方法和不同胶条pH范围的比较，确定17cm（线性，pH3-10）胶条，1200μg的上样量并进行考马斯亮蓝染色为最优条件。在此条件下，可以得到蛋白点较多的双向电泳图，并且与质谱技术兼容。（3）采用优化的双向电泳方法，对MeJA处理0小时和24小时的橡胶草叶片蛋白质组进行了差异分析，结果表明出现了有20个差异蛋白点，其中15个蛋白点表达量上升，5个蛋白点表达量下降。选取10个蛋白点进行蛋白质质谱鉴定，结果表明这些蛋白包括有果糖-1,6-二磷酸醛缩酶、1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/

6、加氧酶大亚基、乌头酸酶等。【结论】本实验建立了适于橡胶草叶片蛋白质组学分析的样品提取方法和双向电泳体系。通过对MeJA处理0小时和24小时的蛋白质表达图谱比较分析，确定差异蛋白点，经质谱检测，数据库搜索初步分析了部分差异蛋白的功能，为橡胶草叶片蛋白质组学的研究提供了一定的技术支持，可为橡胶草资源的合理开发利用奠定理论基础。关键词：橡胶草；茉莉酸甲酯；双向凝胶电泳；蛋白质组Abstract【Object】Usingoneproteomicsmethodtwo-dimensionalelectrophor

7、esis(2-DE)toestablishatwo-dimensionalelectrophoresissystemforTaraxacumkok-saghyzRodin.StudytheinducementcharacteristicsoftheproteinsinTaraxacumkok-saghyzRodin(TKS)afterMeJAtreated.EstablishthefoundationforincreasingtheamountofgumproductionbytreatingtheT

8、KSwithMeJA.【Methods】Byoptimizingtheselectionofsamplepreparation,thedefinitionofproteinquantity,thedyeingmethodandthepHrangeofstrip,establishanappropriatesystemforTKStwo-dimensionalelectrophoresis.Thestudyselectedthree-montholdTKS