高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚

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1、第33卷分析化学（FENXIHUAXUE）研究简报第7期2005年7月ChineseJournaIofAnaIyticaIChemistry1016~1018高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚＊孙爱玲冯蕾柳仁民（聊城大学化学化工学院，聊城252059）摘要建立了高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚的新方法，溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-1%醋酸（5=5=7=3，V/V），上相为固定相，下相为流动相。从100mg厚朴粗提物制得和厚朴酚11333.3mg，厚朴酚19.5mg，经高效液相色谱分析，纯度均大于99.5%，其化学结构由HNMR和CN

2、MR鉴定。关键词高速逆流色谱，厚朴，和厚朴酚，厚朴酚!"引""言高速逆流色谱（high-speedcountercurrentchromatography，HSCCC）是一种不用固态支撑体或载体的液液分配色谱新技术，目前已广泛应用于生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品及地［1］［2］质材料等领域。我国是最早开展HSCCC研究的国家之一，已利用HSCCC分离纯化了芦荟、大［3］［4］［5］［6］［7］［8］黄、丹参、内蒙黄芪、肉苁蓉、山茱萸以及羌活等中药的有效成分。中药厚朴，为木兰科木兰属乔木（MagholiaofficinalisRehd.etwils）

3、的根皮及树皮，具有抗病毒、抗肿［9］瘤、防龋齿、抗菌及抗溃疡等作用。和厚朴酚与厚朴酚为其主要活性成分，二者为同分异构体，结构见图1。本实验利用HSCCC对和厚朴酚与厚朴酚的分离制备进行了研究，建立了HSCCC法分离制备和厚朴酚与厚朴酚的新方法，利用该法可一次性得到纯度高达99.5%以上的纯品。图1和厚朴酚与厚朴酚的化学结构式Fig.1ThechemicaIstructureofmagnoIoIandhonokioI#"实验部分#.!"仪器、试剂与材料TBE-300A高速逆流色谱仪（中国上海同田生化技术有限公司）；KTAprime泵及检测系统（瑞士安玛西亚生物有限公司）；H

4、X-1050恒温器（北京博医康实验仪器有限公司）；1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；色谱柱：SPHERIGELODSC18（250mmX4.6mm，i.d.5!m）；MercurypIus400核磁共振仪（美国瓦里安公司）。厚朴药材购于聊城市利民大药店，经山东中医药大学张永清教授鉴定为道地药材；用于粗提物的制备及HSCCC分离的溶剂均为分析纯（济南试剂总厂）；HPLC分析用甲醇为色谱纯（禹城化工厂）。实验用水为过滤蒸馏水。#.#"样品制备厚朴药材200g粉碎至0.30mm粒径，加入无水乙醇300mL，超声提取3次，每次30min。合并提取液，减压蒸馏，回收乙醇，得

5、厚朴粗提物7.8g，放置在冰箱内备用。#.$"两相溶剂系统及样品溶液的制备HSCCC溶剂体系为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-1%乙酸（5=5=7=3，V/V），按比例配制于分液漏斗中并2004-07-22收稿；2005-02-23接受第7期孙爱玲等：高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚1017剧烈振荡，体系分相平衡后分离出上下相，分别超声脱气30min备用。取100mg厚朴粗提物，加入4mL上相，振荡使之完全溶解，以备HSCCC分离。2.4HSCCC分离过程将石油醚-乙酸乙酯-甲醇-1%乙酸（5I5I7I3，!"!）的上相（固定相）与下相（流动相）以6I4的体积比

6、泵入高速逆流色谱仪的螺旋管，待螺旋管完全充满后，以900r/min的速度旋转，同时以2.0mL/min的流速泵入下相。分离温度由恒温器控制在20C。当体系达到流体动力学平衡后，将样品由进样阀注入分离管路。柱后流出物以紫外检测器检测，检测波长为254nm。根据色谱图手动收集各色谱峰组分。2.5HPLC分析及结构鉴定厚朴粗提物和HSCCC峰组分用HPLC进行分析。色谱柱：SPHERIGELODSC18（250mmX4.6mmi.d.5mm）；流动相：甲醇-1%乙酸梯度洗脱，在20min内，甲醇I1%乙酸由30I70、75I25；流动相流速为1mL/min；检测波长：254nm

7、；柱温：室温；进样量：20mL。113HSCCC各峰组分的结构根据HNMR和CNMR的数据进行鉴定。3结果与讨论3.1HPLC条件优化研究了以甲醇-水、甲醇-乙腈-水、甲醇-1%乙酸等作为HPLC流动相时，厚朴粗提物中各组分的分离效果。结果表明：当采用甲醇-1%乙酸体系进行梯度洗脱（20min内，甲醇I1%乙酸由30I70、75I25），流动相流速为1mL/min时，可取得良好的分离效果。色谱图如图2所示。图2厚朴粗提物和HSCCC峰组分的HPLC色谱图及和厚朴酚与厚朴酚紫外吸收光谱图Fig.2HighperformanceI