自噬小体激活人抗原特异性t细胞作用研究

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1、隶。初大·磐博士学位论文万方数据自噬小体激活人抗原特异性T细胞作用研究万方数据PRESENTATIoNoFANTIGENSINAUToPHAGoSoMELEADSTOEFFICIENTACTIVATIoNoFANTIGEN．SPECIFIC删mM衄扎sI㈣嬲ADissertationSubmittedtoFortheAcademicDegreeofDoctorofMedicineBYYEWeiProf．ZHA0WeiMedicalSchool万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导

2、下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：竺垒日期：．抽f平一毋鼍一＼工东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密

3、期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：生!圭导师签名：万方数据中文摘要自噬小体激活人抗原特异性T细胞作用研究博士研究生：叶伟指导老师：赵伟东南大学医学院(210009)细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicityTlymphocyte，CTL)在机体清除肿瘤细胞以及入侵病原体过程中发挥重要作用。近年来，如何有效激活机体抗原特异性CD8+T细胞一直是肿瘤及感染性疾病治疗性疫苗发展的重要方向。交叉提呈指抗原提呈细胞摄取

4、，处理，并通过主要组织相容性复合体I(majorhistocompatibilit)rcomplexI，MHCI)类分子提呈外源性抗原(如肿瘤细胞抗原)给CD8+T细胞识别的过程。抗原交叉提呈是诱导抗原特异性CD8+T细胞激活的主要通路。交叉提呈的研究主要集中于树突状细胞(dendriticcell，DC)如何摄取，处理，提呈抗原。关于肿瘤抗原如何形成和提供给DC研究的较少，一般认为肿瘤抗原由肿瘤细胞被动的释放，而不是主动包装与分泌。本研究小组既往研究发现肿瘤细胞的自噬途径通过抗原的富集，包装和分泌而对交叉提呈起决定

5、性作用。自噬是机体用于保持稳态的过程，其基本过程包括将细胞浆成分隔离于双层膜中形成自噬小体，随后自噬小体与溶酶体融合形成自噬溶酶体，其中的细胞成分被溶酶体中的蛋白水解酶降解并进入再循环。胡红明课题组发现肿瘤细胞的自噬在肿瘤抗原交叉提呈中发挥重要作用，自噬小体可作为抗原的载体有效诱导交叉提呈。基于这些发现，其发展了一种叫做富含短寿蛋白的白噬小体(DRipsinblebs，简称DRibbles)的新型肿瘤疫苗，主要由自噬小体组成。生理情况下，肿瘤细胞来源的囊泡很少包含泛素化蛋白，但DRibbles来自于蛋白酶体抑制剂及溶

6、酶体抑制剂处理后的肿瘤细胞，包含了多种肿瘤细胞成分，包括长寿蛋A、泛素化短寿蛋白及废蛋白。DRibbles能够在体内外有效交叉激活抗原特异性CD8+T细胞，来源于小鼠肿瘤细胞的DRibbles能够治疗小鼠黑色素瘤、肺癌、乳腺癌及肉瘤。然而，既往DRibbles的相关研究均以小鼠为对象，DRibbles是否能有效激活人抗原特异性T细胞尚未可知。针对以上研究现状和问题，本文评估了DRibbles是否可以有效激活人记忆性抗原特异性CD8+及CD4+T细胞以及作用的最佳条件；分选了人外周血单个核细胞中的DC亚群，比较各DC亚

7、群提呈DRibbles功能的差异；采用GM—CSF／IL一4及GM—CSF／IFN一12[体外诱万方数据查塑奎堂壁主兰堡堕墨导单核细胞分别生成IL一4DC及IFN—QDC，比较了这两种体外培养DC提呈DRibbles，激活T细胞功能的差异。本研究将有助于阐明DRibbles的作用机制，研发基于树突状细胞及自噬小体的疫苗治疗肿瘤或感染性疾病。研究主要分为3个部分：1．DRibbles诱导人外周血记忆性抗原特异性T细胞激活目的：探讨DRibbles激活人抗原特异性T细胞功能。方法：用表达巨细胞病毒(cytomegalov

8、irus，CMV)pp65蛋白或者编码HLA．A2限制性CMV、EB病毒、流感病毒(cytomegalovirus、epstein—ban"virus、influenzavirus，CEF)抗原表位的质粒转染人胚胎肾细胞株HEK293T或者人肺癌细胞株UbiLT3，从这些能够表达病毒抗原的细胞中提取DRibbles或细胞裂解产物，将其负载至人单