黑曲霉糖化酶淀粉结合区环化重排及其对糖化酶生淀粉降解性能的影响

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1、万方数据分类号：9939．9洳≥：0、唼单位代码：学号：103352110703l硕士学位论文中文论文题目：英文论文题目：ThecirculationpermutationofStarch-bin-．fromAspergillusnigeranditseffectonraw．．．starchdegradation．作者姓名刻傲万方数据论文作者签名：茎9熬指导教师签名：，么丝墨论文评阅人l：鲑里鎏熬援逝堑王些太堂评阅人2：湮剑教援浙逗王些太堂评阅人3：奎金动副．数握堑江王商态堂答辩委员会主席：遏明当数援逝塑太堂委员1：矗漫鲞熬援浙江太堂委员2：工查出教拯逝婆虫医荭叁堂委员3：裘妲莲熬援逝江王

2、些太堂委员4：昱雪昌敦援浙江太堂万方数据浙江大学硕士学位论文浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝适太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：刳欢学位论文版权使用授权书)DJ牛+年3月8FI本学位论文作者完全了解逝婆太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝堑太堂可以将学

3、位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：毒’J饮一名：易砖鸬签字日期：2DJ甲年岁月8日签字日期：∞Iq年)月矿日万方数据浙江大学硕士学位论文致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．．．．．．．⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5盲茸言⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．实验菌株和质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．1YPD培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．2LB培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1023pet28a原核体系表达培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．4MD培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．5发酵表达培养基⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯103．实验仪器和装置⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．114．试剂盒、工具酶和化学试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．114．1试剂盒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．114．2工具酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11413化学试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l15．引物设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯145．1ANG糖化酶基因获得引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯145．2ANG—SBD基因环化引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1

6、45．3重组质粒构建验证引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．155．4ANG—SBD的SBD结构域区域被替代所用引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯156．实验方法与步骤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯166．1黑曲霉糖化酶基因的sBD结构域的环化)及SBD—pet28a重组载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。166．2黑曲霉糖化酶基因毕赤酵母表达载／体ANG．SBD-pPIC9KI拘构建．．236．3六种环化基因替代ANG-SBD—pPIC9K载体的sBD结构域，获得六种重组毕赤酵母表达载体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．30

7、6．4pet28a重组菌株的表达实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31万方数据浙江大学硕士学位论文6．5六种环化重组菌株和ANG．SBD．pPIC9K对照菌株表达实验⋯⋯．．34结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一37I．黑曲霉基因组SBD结构域的环化及六种目的基因的获得⋯⋯⋯⋯⋯⋯．371．1CPred软件预测环状变换位点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．371．2糖化酶SBD的环化