天津市流感病毒分子流行病学初步的研究

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1、天津医科大学硕士学位论文天津市流感病毒分子流行病学的初步研究姓名：李颖申请学位级别：硕士专业：医学微生物学指导教师：陈锦英20030801天津市流感病毒分子流行病学的初步研究摘婺流行性感冒(流感)是危害人粪健康的常见急性传染痫，以其抗原变异频繁虽攮发大嚣著称，圆瑟流感瘸攥酌实验室鉴溺戈惫重要。流感是第一个实行全球性监测的传染瘸，天津自2001年起被WHO纳入流感般铡网点。对天津市流感瘸薄进行流行瘸学初步研究，为防治流感提供分子生物学基础是零岳胥究之强的。本研究叁2001年至2003年在天津市备夫医院采爨流罄样病人标本5

2、43份，缀MDCK细胞和鸡胚分离墙养病毒，得到AI(H1N1)礴株13赞，A3(H3N2)毒拣75彦}，B毒拣斡资，2001--2002年天津枣溅行谯势椽为A3(H3N2)(42，64)，2002--2003年流行优势株为B(90／123)，两年间发生了流感病二毒优势流行株型的改变。继丽，我翻愆掰发现酶A3《耩3N2)耍型“O”相毒拣遴杼分子生物学的韧步t研究，提取病毒液中的RNA，设计引物进行RT-PCR扩增HAl基因全序列，将扩增产锈竞瞳予PMD-18Tvector或pGEM—Teasyvector，筏建重缝壤羧。

3、对荚进行序别分析显示，在受体结合部位后壁第183位氨基酸做点上“O”相簿株为『‘组氨黢(H)，蔗“D”相为亮氨黢(L)。未发现国外文献报道的。194位，226位i氨基酸的改变。在相应豹乙型流感病毒“O”籀变异酶研究巾，发现了197位土增加了糖基化位点，符合国外报道。这一结果表明，流感痫毒的相变异机制复杂，它霹糍与HA豢鑫弱寒缓缝毒奄藩交嚣细藏凌覆痍毒受傣麴交诧密穗竣美，毒待进一步研究。为了明确2002—2003年天津市B型流感瘸毒抗原变髯的枫戴，我们选择分离出的有代表性瀚8株毒撩(1椽为Yagamata系，其余为Vic

4、toria系)，握取瘸毒液RNA，利用逆转录聚合酶链艇应一单链构浆多态性(RT-PCR．SSCP)对乙奎流感瘸毒易发生黧器敦HAl鄂分308bp萋困片段进行突燮筛选，根据奄泳潜强形不同将其分为4类，每类中各选一株PCR产物直接测序，将所扩增的片段与国露流行辕B嫩。ngk。鞋g据30，20el(Victoria系)毙较，B，天涤／02／145类簿栋，tB，天津／02／221类毒株，B／天津／02／222类毒株，核苷酸序列间源性分别为：964％，96，4％，99．O％，与B／Sichuan／379／99(Yagamata系

5、)比较，B／天津／02／12l类毒棘棱萤酸序列鞫源性为93．1％。在荔交彝送沈较，嗣源羧仍髓这羽90％懿上，结果袭明，天津市B型流感病毒抗原交异幅度坷i大，属于抗原漂移，成密切关注萁变化趋势。与鼗阂时，本研究曼示了SSCP{睾先良籽鲍流感疯毒流行糠簿选方法韵可行性，值得在今后的工作中采纳和进一步研究。!关键滔：流感病毒漉孬瘸学调查穗交羚单穗擒象多态佳HA萋因2。'，PrimaryStudtyontheMolecularEpidemiologyofInfluen'主aVirusesinTianjinAbstract．kI

6、nfluenzaisacommonacuteineectiousdiseasewhichisharmfullohumanhealth．Influenzavirusisveryfamousforitswiderangeandfrequentvariafitch，sothevirussurveillanceisquiteimportantInfluenzaisthefirstineectiousdiseasewhichwaspracticedsurveillancearoundtheworld吵TianjinWaSadmi

7、ttedtooneoftheInflfienzaSurveillanceNetworksbyWHOfrom2091．‘秘lopurposeofthisstudyistoinvestigateInfluenzaepidemiologyinTianjinandprovidemolecularbiologybasisforInfluenzapreventionandcure．543sampleswef#collectedfrominfluenza，likepatientsinTianjinfrom209lto2093，MDC

8、Kcelland9-llday-oldembryonatedeggswereusedtoviruscultivationandisolation．Wegot13viruseserAl(HINl)，75virusesofA3(H3N2)and99virusesofB．ThecirculatingdominantstrainWaSbe