基于蚓粪菌群的土传病害拮抗菌筛选与复合菌剂研制

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1、分类号UDC学位论文学号丛!!!!!!密级——基于蚓粪菌群的土传病害拮抗菌筛选与复合菌剂研制陈浩指导教师姓名：申请学位级别：论文提交日期：学位授予单位：塑焦鏊撞!扬刿盘堂!垄菱堑刿!121QQ2硕士至鱼!墨生墨旦堑刿盘鲎学科专业名称：圭璧堂论文答辩日期：至Q!圣生墨旦学位授予日期：星Q!呈生鱼月答辩委员会主席：筮±堂垫丝论文评阅人：查E堑塾蕉蓝丛查!塾蕉2013年5月学位论文基于蚓粪菌群的土传病害拮抗菌筛选与复合菌剂研制专业名称：土壤学指导老师：胡健教授研究生：陈浩扬州大学二。一三年五月中文摘要中文捅姜随着种植面积和年限的逐年增加，作物连作障

2、碍问题已成为我国设施农业发展的限制因素之一。已有研究表明，作为有机废弃物生物消解产物，蚯蚓粪可以改善土壤理化性质、调节土壤微生物生态，能有效解除作物连作障碍，这些功能的实现可能与蚯蚓粪微生物群落特征密切有关。开展蚯蚓粪微生物群落特征研究，筛选并利用蚯蚓粪有益微生物，对于拓展蚯蚓粪的土壤生态调节功能具有重要意义。本文初步研究了蚯蚓粪微生物群落多样性特性，从蚯蚓粪及园土中筛选获得若干具有广谱拮抗和体外促生活性菌株，并进行了分子鉴定，同时，在分析了菌株间的相容性，以及优化菌株混合发酵条件的基础上，构建了细菌及放线菌两类混合菌剂，并初步应用于黄瓜连作

3、栽培试验。主要研究结果如下：(1)以牛粪、猪粪和污泥等常见有机废弃物作为蚯蚓饵料，利用细菌16SrDNAV3区特异扩增及变性梯度凝胶电泳(PCR．DGGE)技术，比较了不同饵料及饵料改变对蚯蚓粪细菌群落结构多样性的影响。结果表明：与所取食的饵料相比，蚯蚓粪细菌群落结构多样性均有不同程度的下降，蚯蚓粪与对应饵料之间细菌群落结构相似性范围为15．3％37．7％；来自不同饵料的蚯蚓粪细菌群落结构相似性范围为17．2o／旷39．1％，其中以牛粪和猪粪为饵料时，蚯蚓粪细菌群落结构相似性最高，与对应的饵料细菌群落结构相似性相比，提高了近l倍；当饵料由猪粪

4、改为牛粪后，随着时间延长，蚯蚓粪细菌群落结构多样性逐渐下降并趋于稳定，并且蚯蚓粪与饵料牛粪的细菌群落结构相似性由0d的33．2％逐渐下降到21d的14．8％并趋于稳定。由此可知，饵料的种类及转换可以影响蚯蚓粪细菌群落结构多样性。(2)利用对峙平板试验从蚯蚓粪和园土中筛选得到对黄瓜枯萎病菌(Fusarisumoxysporumf)，黄瓜立枯病菌(R厅忍Dc，o行肠solaniKiihn)、小麦根腐病菌(Cochliobolussativu)和西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporiumj3具有拮抗作用的细菌及放线菌22株，其中12个菌株对

5、上述病原菌具有较好的及广谱的拮抗作用，同时还具有不同程度的体外促生能力。根据形态学特征和16SrRNA序列分析对比发现：8株细菌均为芽孢杆菌属(Bacillus)，4株放线菌均为链霉菌属(Streptomyces)。(3)对供试菌株生长的相容性、适宜pH值范围及培养基的研究结果表明：II中文摘要8株细菌之问及4株放线菌之间均具有良好的相容性；8株细菌和4株放线菌培养适宜pH值范围均为6～8；对混合菌剂培养基配方进行优化，提高了拮抗和促生活性。(4)利用平板培养法和PCR．DGGE法，研究了细菌及放线菌两种复合菌剂灌根处理对连作黄瓜根际土壤微生

6、物数量及多样性的影响。结果表明：在不同的旌肥条件下，细菌菌剂和放线菌菌剂处理能不同程度地提高黄瓜根际土壤中细菌和放线菌数量，降低真菌数量，同时普遍提高了根际土壤细菌与真菌及放线菌数量的比值。细菌菌剂对根际细菌的促进作用在不施肥及复合肥+有机肥背景下表现突出，而放线菌剂的促进作用在复合YJE+微生物肥及复合肥背景下表现突出。两种菌剂对根际微生物的比例及细菌群落结构的调节作用因施肥背景的不同而存在差异。关键词：蚯蚓粪；拮抗菌；复合菌剂；连作障碍；细菌群落多样性ABSTRACTIIIWimtheincreasingofplantedareaandc

7、uhivingtime．continuouscroppingobstaclesofcropisbecomingseriousproblemandlimitingthedevelopmentofargriculturalindustry．Vermicompost，whichwasgeneratedfromorganicwastebyearthworm，havebeencommercializedasasubstrateandfertilizer．Itpromotedphysicalandchemicalofcontinuouscroppings

8、oil，regulatedsoilflora．Multiplefunctionswererelevantedbeneficialmicrobeofvermicomp