cu2+胁迫对多齿围沙蚕毒性效应的研究

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1、学校编码10390分类号S949学号2010219015密级内部3年硕士学位论文2+Cu胁迫对多齿围沙蚕毒性效应的研究指导教师：阎希柱教授作者姓名：赵圆圆申请学位级别：硕士专业名称：水产养殖论文提交日期：2013年4月15日论文答辩日期：2013年6月6日学位授予单位：集美大学学位授予日期：答辩委员会主席：王桂忠教授论文评阅人：万方数据硕士学位论文2+Cu胁迫对多齿围沙蚕毒性效应的研究2+AstudyonthetoxiceffectofCuonPeriereisnuntiaSavigy学科门类：农学作者姓名：赵圆圆指导教师：阎希

2、柱教授专业名称：水产养殖学位授予单位：集美大学论文答辩日期：2013年6月6日万方数据集美大学硕士学位论文3cm左右集美大学硕士学位论文Cu2+胁迫对多齿围沙蚕毒性效应的研究Cu2+胁迫对多齿围沙蚕毒性效应的研究赵圆圆3cm左右万方数据学术诚信声明兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。本人依法享有和承担由此论文产生的权利和责任。声明人（签名）：时间：保护知识产权声明本人完全了解集美大学有关保留、使用学位论文的

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4、及机理研究，可以探讨利用生物修复滩涂重金属污染的可能性，具有重要的现实意义。多毛类动物生活于滩涂，分布广、种类多、数量大，生活方式独特，在海洋生态系统中占重要地位。沙蚕为海洋底栖多毛类动物的典型代表，也是优势类群和多样性最为丰富的一个科，在近岸水域食物网的物质循环和能量流动中起着重要作用，且具有较高的经济价值。本文以多齿围沙蚕为受试生物，以重金属污染的典型代表铜为污染物，按Cu2+对沙蚕的96h半致死浓度（LC50）的1/8、1/6、1/4、1/2，即136μg/L、182μg/L、273μg/L、545μg/L设置4个浓度梯度

5、，以海水为对照组，进行4d和14d的暴露实验，通过生化酶学检测、实时荧光定量、单细胞凝胶电泳和铜元素含量分析等手段，分别从生理水平、分子水平等来探讨Cu2+对沙蚕的毒性效应。研究结果如下：1.通过对超氧化物歧化酶（SOD）的活性、过氧化氢酶（CAT）的活性、还原型谷胱甘肽（GSH）的含量和乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性的测定，发现暴露4d后，136μg/L的Cu2+即可诱导SOD、CAT的活性，同时GSH含量增加，但诱导效应随生物标志物性质的不同而不同，如SOD、CAT在Cu2+浓度为273μg/L时活性最大，而GSH含量在Cu

6、2+浓度为182μg/L时即达最高值，随后各指标的活性和含量下降，CAT的活性在545μg/L时受到抑制；在所有实验组内，AChE的活性都受到抑制，并且随铜离子浓度的升高抑制效应增强，136μg/L组的抑制效应并不明显，但545μg/L组的抑制效应十分显著（P<0.01）。和4d时相比，暴露14d后酶的活性和GSH含量均有下降，CAT和AChE的活性抑制效应增强，GSH的合成受到抑制。2.在Cu2+的胁迫下，暴露4d后低浓度的Cu2+能够诱导金属硫蛋白（MT）的合成，并且在273μg/L时的诱导效应最强，MT含量最高，到最高浓度

7、545μg/L时，MT含量又恢复到对照组的水平；暴露14d后136和182μg/L组对比对照组，MT含量仍有所增加，但差异不显著（P>0.05），273和545μg/L两组MT合成受阻，含量下降。和4d时相比，暴露14d后，各组沙蚕MT含量都有不同程度的降低，以273μg/L组沙蚕体内MT含量极显著下降（P<0.01）。说明沙蚕体内MT对重金属铜在一定范围和时间内的响应比较灵敏，可以作为监测Cu离子的生物标志物。3.通过筛选克隆，获得一条205bp的基因片段，经Blast分析推测属于蚯蚓肌血红蛋白家族，证实为多齿围沙蚕的MPII

8、基因。实时荧光定量PCR结果显示，暴露4d后，在0、II万方数据136、182和273μg/L时，沙蚕体内MPII基因表达量显著升高（P<0.05），铜离子浓度为273μg/L，MPII基因的相对量最大，为对照组的3.87倍；在545μg/L时表达量下降；暴露1