毕赤酵母表达hbsag的分离纯化和鉴定

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1、遵义医学院硕士学位论文独创性声明遵义医学院硕士研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均己在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：燔^健签字日期：冽弓年岁月遵义医学院学位论文版权使用授权书，7日本人完全了解遵义医学院有关保留、使用学位论文的规定，；即：遵义医学院有权保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权遵义医学

2、院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学位论文，即：遵义医学院具有学位论文的数字化制品复制权，信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。学位论文作者签名：谗冬便签字日期：弘，弓年J月I一7日导师塞名—两揖．签字日期：们，弓年r月加日遵义医学院硕士学位论文英文缩略词表Ⅲ哪㈣删IIIIIIIIlUlllllllllllUlY2341061缩略词HB耶VHBsAgCHOPEGSDSPAGEPBSKD脚心LCELISAr／miIlmSEDTADTTTriS

3、BSATEMED英文全称中文全称HepatitisB乙型肝炎HepatitisBVirus乙型肝炎病毒HepatitisBsurfaceAntigen乙型肝炎表面抗原ChinaHamsterOvary中华仓鼠卵巢Polyethyleneglycol聚乙二醇Sodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠Polyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳Phosphatebuffersolution磷酸盐缓冲液Kilodalton千道尔顿Horse．radishperoxidase辣根过氧化物酶Highperform

4、anceliquidchromatography高效液相色谱法Enzymelinkedimmnosorbentassay酶联免疫吸附法Rotationsperminute每分钟转速Microsiemens毫西门子Ethylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸Dithiothreitol。二巯苏糖醇Trilhydroxymethylaminomethane三羟甲基氨基甲烷Bovineserumalbumin牛血清白蛋白Tetrarnethylethylethylenediamine四甲基乙二胺遵义医学院硕士学位论文目录目录1、论

5、文：毕赤酵母表达HBsAg的分离纯化和鉴定英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．j⋯⋯⋯⋯⋯．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯332、综述：基因工程I-msAg纯化技术研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯363、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯464、作者简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47基金项目：贵州省免疫学研究生教育创新基地重点培育项目(黔免疫基地【2011】02号201103)遵义医学院硕士学位论文中文摘要毕赤酵母表达HBsAg的分离纯化和鉴定中文摘要目的：(1)建立一套以柱层析为主的毕赤酵母表达HBsAg的分离纯化工艺，对HBsAg进行生物学性质鉴定；(2)制备重组毕赤酵母乙型肝炎疫苗，检测重组乙型肝炎疫苗诱导小鼠抗体应答。方法：(1)

7、毕赤酵母GSll5发酵液高速离心收集菌体，加入细胞裂解液乳化高压均质机破碎，破碎液经聚7,--醇沉淀法澄清样品，上清液调整pH值，电导率和自身浓度，DEAE阴离子交换层析，收集合格样品进行苯基疏水层析，超滤浓缩脱盐，收集浓缩液，经过凝胶过滤分子筛层析收集纯化终产品；(2)Western-blot免疫印迹和还原型SDS．PAGE银染法检测HBsAg特异性，扫描电镜观察HBsAg颗粒形态，ELISA法检测HBsAg含量，高效凝胶分子筛液相方法检测HBsAg纯度；(3)AIC13溶液缓慢恒速流加NaOH溶液制备AI(OH)3佐剂，纯化终产品稀释至一定浓度加入

8、等体积的铝佐剂搅拌混匀，制备终浓度为20gg／ml的疫苗成品；(4)腹腔注射BALB／c小鼠重