白藜芦醇衍生物抗炎活性的研究

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150208413上海海洋大学硕士学位论文题目：白藜芦醇衍生物抗炎活性的研究Studyonanti-inflammatoryactivityof英文题目：resveratrolderivatives专业：食品科学与工程研究方向：功能性食品姓名：姚昀指导教师：刘克海，王明福二○一八年五月二十日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果

2、。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保

3、密本学位论文属于，在年解密后适用本版权书。不保密学位论文作者签名：指导老师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文白藜芦醇衍生物抗炎活性的研究摘要非甾体抗炎药是目前世界上应用最广泛的抗炎药，长期大量服用会产生消化不良或胃肠道毒性等副作用。因此，发掘具有抗炎作用的天然产物具有重大意义。近年来，白藜芦醇的抗炎作用已得到国内外学者的广泛证实，但由于白藜芦醇结构中苯环上的羟基极易被氧化，导致结构和活性的不稳定，临床疗效并不令人满意。因此，对白藜芦醇的结构进行改造，得到类似活性的衍生物是目前重要任务之一。本

4、课题选取三种白藜芦醇甲基化衍生物为研究对象，评价其是否具有抗炎的作用，并对具有抗炎作用的化合物进行作用机制分析。三种化合物分别为紫檀茋、松茋和白藜芦醇-4’-甲醚，鉴于其苯环上的羟基被甲氧基取代，亲脂性增强，更有利于进入细胞并发生作用，可能会增加其生物利用度。第一章主要介绍了炎症的概况、炎症介质和炎症相关的信号转导通路，白藜芦醇及其生物活性的研究概况以及白藜芦醇衍生物及其生物活性的研究概况。第二章主要是采用脂多糖诱导RAW264.7细胞建立体外细胞炎症模型。分别用50，100，150ng/mL三种浓度的LPS处

5、理细胞24h后，采用Trizol试剂提取细胞RNA，通过逆转录以及qPCR检测细胞产生的炎症因子（MCP-1、IL-6、IL-1和TNF-）mRNA水平的表达量，以此来判断炎症反应的强度。结果显示炎症因子表达量呈剂量依赖型增长，当浓度达到100ng/mL时，炎症因子表达量均达到极显著效果，因此，最终选取100ng/mL的LPS进行后续的试验。第三章主要是筛选出具有抗炎作用的化合物。首先，采用结晶紫染色法检测紫檀茋、松茋和白藜芦醇-4’-甲醚对细胞存活率的影响，紫檀茋和松茋在超过10M时对细胞存活率有显著降

6、低作用，而白藜芦醇-4’-甲醚毒性较小，最大无毒浓度为30M。因此，本课题最终选取的给药浓度均为5M。在100ng/mL的LPS诱导RAW264.7细胞产生炎症反应的基础上，三种化合物分别进行干预，LPS与化合物同时添加，共同培养24小时。采用TRizol试剂提取细胞RNA，通过逆转录以及qRT-PCR检测MCP-1、IL-6、IL-1和TNF-的mRNA表达量。结果显示，紫檀茋和白藜芦醇-4’-甲醚能够不同程度的抑制炎症因子的表达，发挥良好的抗炎活性，而松茋没有显示出抗炎的功效。因此，后续试验选取紫檀

7、茋和白藜芦醇-4’-甲醚进行抗炎机制分析。I上海海洋大学硕士学位论文第四章主要是对紫檀茋和白藜芦醇-4’-甲醚抗炎机制的分析。首先，对紫檀茋和白藜芦醇-4’-甲醚的抗炎作用进行验证和补充，采用qRT-PCR方法检测炎症因子（MCP-1,IL-6,IL-1和TNF-）以及eNOS、iNOS和COX-1、COX-2、mPGEs-1的mRNA表达水平，硝酸还原酶法检测细胞培养液中NO释放量，酶联免疫吸附法检测细胞培养液中PGE2含量。结果显示，紫檀茋和白藜芦醇-4’-甲醚均能显著抑制四种炎症因子mRNA的表达；另

8、外，紫檀茋能够通过下调iNOS的mRNA表达水平（P<0.001）来抑制NO的释放（P<0.001），且能够显著抑制PGE2的释放量（P<0.01），而白藜芦醇-4’-甲醚可以同时下调iNOS和eNOS的mRNA表达水平（P<0.01）来抑制NO的释放（P<0.05），但对PGE2及其相关COXs都无明显作用，提示白藜芦醇-4’-甲醚发挥抗炎作用并不通过COX途径。其次，采用Weste