第二章 蛋白质new

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1、本章主要内容一．蛋白质概述二．氨基酸(重点)三．多肽（重点）四．蛋白质的结构（重点）五．蛋白质结构与功能的关系（重点）六．蛋白质的性质（重点）七．蛋白质的分离纯化与鉴定（重点）四、TheStructuresofProteins¢蛋白质：是由一条或多条多肽链以特殊方式结合而成的生物大分子。¢与多肽并无严格的界线。氨基酸残基数>40蛋白质分子量>4400D¢分子量变化范围很大。约5KD~1,000KD，甚至更大。四、TheStructuresofProteins1.蛋白质结构层次的界定¢蛋白质结构非常复杂。¢1969年，IUPAC对蛋白质高级结构的不同层次作了界定。¢一级结

2、构：肽链的线性结构。空间结构：肽链的卷曲、折叠等。包括二级、三级和四级结构。FourLevelsofProteinStructure¢Primarystructure---thelinearsequenceofaminoacidsinthechainandthelocationofthedisulfidebridges(二硫键).¢Secondarystructure---theconformation(构象)ofsegmentsofthebackbonechain（主链）ofaprotein.¢Tertiarystructure---thethree-dimensio

3、nalarrangementofalltheatomsintheprotein.¢Quaternarystructure---thewaythesubunits(亚基)arearrangedinspace.FourLevelsofProteinStructure亚基四、TheStructuresofProteins2.PrimaryStructure¢蛋白质的一级结构包括以下内容：----组成蛋白质的多肽链数目----多肽链的氨基酸顺序----多肽链内或链间二硫键的数目和位置2.PrimaryStructure¢最重要的内容：多肽链的氨基酸顺序原因：----蛋白质生物功

4、能的基础----预测空间结构----蛋白质分类、进化、功能牛胰核糖核酸酶的一级结构蛋白质一级结构的测定¢1953年，F.Sanger测定了胰岛素的一级结构，1958年获NobelChemicalPrize。蛋白质一级结构测定内容①测定蛋白质中氨基酸组成，根据蛋白质分子量，计算出构成蛋白质的各种氨基酸的数量。②测定蛋白质分子中多肽链的数目。③二硫键的断裂及多肽链的拆分。④多肽链的选择性降解及各肽段的氨基酸顺序测定。⑤重叠法拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。⑥多肽链中二硫键位置的确定。蛋白质一级结构测定步骤及方法组成分析纯蛋白质氨基酸组成N-端分析纯蛋白质肽链数目拆分选择性水解

5、纯蛋白质各条肽链氨基酸顺序分析各肽段的氨基酸顺序小肽段（至少两组）对角线电泳纯蛋白质二硫键位置(1)AminoAcidsAnalysisinProtein¢Thenumberandkindsofaminoacidso¢6NHCl,heatingat100Cfor24h¢automatedaminoacidanalyzer?AutomatedAminoAcidAnalyzer氨基酸组分分析仪氨基酸标准样品和人类缓激肽水解物的氨基酸组成分析谱(2)EndGroupAnalysis¢末端氨基酸分析多肽链的数目蛋白质分子量¢多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸C-端氨基酸¢最

6、重要的是：N-端氨基酸分析法(2)EndGroupAnalysis①2,4－二硝基氟苯（DNFB）法---Sanger法---N-端测定法---产物为黄色DNP-氨基酸。可用乙醚抽提分离，有紫外吸收。可用色谱法进行鉴定。---不能继续对肽链其余氨基酸进行测定。PrincipleofDNFBMethod2??222222(2)EndGroupAnalysis②丹磺酰氯(Dansylchloride)法---N-端测定法，常用。---产物为丹磺酰-氨基酸。有很强的荧-9光性质，检测灵敏度可以达到1×10mol。---不能继续对肽链其余氨基酸进行测定。PrincipleofD

7、ansylChlorideMethodN(CH3)2N(CH3)2RO+H2NCHC+SO2ClSO2RONHCHCN(CH3)2HO+3+SO2RONHCHCOH(2)EndGroupAnalysisÉ肼解(hydrazinolysis)法¢C-端测定法¢多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来¢其他氨基酸则变成肼化物。经与苯甲醛缩合成不溶于水的物质，与C-端氨基酸分离。PrincipleofhydrazinolysisMethodROROn-1RnOH2NCHCHNCHCHNCHCOHN-端氨基酸C-端氨基酸RORnO