利用人内皮抑素基因构建植物表达载体及对烟草遗传转化

《利用人内皮抑素基因构建植物表达载体及对烟草遗传转化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、内蒙古大学硕士学位论文利用人内皮抑素基因构建植物表达载体及对烟草的遗传转化摘要，●人内皮抑素(Endostatin)是第一个进入临床研究的内源性血管生成抑制剂，是胶原蛋白XⅧC末端非胶原区NCl结构域的20KD的片段。它可以抑制内皮细胞的增殖和转移，从而降低肿瘤内血管生成，阻断营养通路，达到杀死肿瘤细胞的目的。其最大的优点是无毒性和无抗药性。植物生物反应器生产药物蛋白成本低，生产等量目的蛋白只需要花其它表达系统所需费用的10％，而且一旦建立起稳定而高效的表达系统，只需扩大种植面积就可大量生产目的蛋白。本研究将人内皮抑素基因重组于植物双元

2、表达载体pGA643，得到重组质粒pGE；用三亲融合法将其导入农杆菌LBM404中，采用叶盘法转化烟草，经诱导与筛选，获得了卡那霉素抗性植株；提取抗性植株总DNA，通过PCR、斑点杂交和Southern杂交检测，筛选出了整合有外源基因的转化植株，为进一步研究人内皮抑素在烟草中的表达及生物学功能奠定了基础。关键词：人内皮抑素，烟草，根癌农杆菌，生物反应器内蒙古大学硕士学位论文CONSTRUCTIONOFPI。ANTEXPRESSIONVECTORWITHHUML▲NENDOS卫鲴['INGENEANDTRASFORM姗ONOFTOBACC

3、oABS卫RAC·Endostatin，acarboxy·terminal20KDafragmentofthenon-collagenous(NC)1domainofcollagenXⅧ，isthefirstendogenousangiogenesisinhibitorenteringhumanclinicaltherapy．Itcaninhibitendothelialcellmigrationandmultiplicationtoreducethevascularizationoftumorsandfinallykilltumors

4、．Thegreatadvantageoftheagentliesinitslesstoxicityandnotinducingdrugresistancewhenused．Theuseofplantbioreactorsfortheproductionofrecombinantpharmaceuticalproteinsissafeandinexpensive．Cultivatingtransgenicplantsonanagriculturalscalewillproducealmostunlimitedsuppliesofrecom

5、binantproteinsforusesinmedicine．TheplantexpressionvectorpGE，carryingahumanendostafingene，WASconstructed．pGEwasintroducedintoAgrobacteriumtumefaciensbytriparentalmating．TobaccoleafdiscsweretransformedviaAgrobacteriumtumefaciensmediatedprocedure．Transgenictobaccoplantletsg

6、rewininductionmediumandplantsresistanttokanamycinwereobtained．PCR，DotblottingandSouthernhybridizationanalysisconfirmedthathumanendostatingenehadintegratedintothegenomeoftobacco．KEYWORD：humanendostatin，tobacco，Agrobacteriumtumefaciens，bioreactor利用人内皮抑素摹冈构建植物表达载体及对烟草的遗传转化引

7、言肿瘤一直是人类难以攻克的顽症，Folkman等通过试验发现实体肿瘤的生成、转移须有血管的生成，提出抑制肿瘤血管的形成可作为治疗肿瘤的一种新的治疗途径【“甜。1997年0、Reilly等13l从小鼠血管内皮瘤EOMA细胞的培养上清液中分离获得了一种可抑制新生血管生成的天然分子，命名为内皮抑素(Endostatin)。同年，我国徐根兴14I教授在研究内皮细胞的过程中发现了人内皮抑素，并从人肝cDNA文库中筛选克隆得到人内皮抑素基因。内皮抑素是胶原蛋白XⅧC末端非胶原区NCl结构域的184个氨基酸的多肽片段，分子量为20KD，具有肝素结合的

8、能力【3’5～。实验表明内皮抑素是内皮细胞增殖、迁移和血管生成的专一抑制剂，在小鼠肿瘤模型中可抑制肿瘤的形成及转移，使已形成的肿瘤萎缩，并且反复施用无耐药性和毒性的产生【7’8’9J，因而内皮抑素一度成为肿