重组人粒细胞集落刺激因子对脑缺血再灌注大鼠的神经保护和自噬作用的研究

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniVersityforthedegreeofMaster(doctor)TheR01eofrhG—CSFontheNeuroprotectiVeandAutophagyaflcerCerlobralIschemiainRatsByW'e巧ingDengSupervisor：ProfJunfangTengNeurologyThefirstAmliatedHospitalofZhengzhouUniVersityOctober，2013学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下

2、，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位敝懈《谢日期沙／弓年，胡≯同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、

3、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学雠文懈&p磅日锄f≥年，调≯日中文摘要摘要第一部分：重组人粒细胞集落刺激因子对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用目的：利用局灶性脑缺血再灌注模型，观察rhG．CSF对脑缺血后的神经保护作用。方法：健康雄性SD大鼠，质量280～3209。随机分为3组：假手术组(sham组)，生理盐水对照组(Nacl组)，rhG．CSF治疗组。每组又随机分为缺血24h、7d和14d时问点组，每一时间点均为6只大鼠。线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型：按Zea．Longa5分制标准评分，其

4、中O分和4分者被剔除。动物模型缺血90min时再灌注，于再灌注丌始，治疗组予rhG—CsF50肛∥(kg·d)，腹部皮下注射，连续5天。生理盐水对照组予等量生理盐水。每只大鼠均于缺血再灌注24h、7d、14d时分别进行神经功能缺损评分，评分标准应用改良神经功能缺损评分表。各组大鼠分别记录死亡数。结果：1、死亡率统计：为保证Nacl组和rhG．CSF治疗组每个时间点实验成功动物数均为6只大鼠。Nacl组共进行39只大鼠的模型制作，总死亡率为53．85％(2l／39)。给予50“∥(kg·d)的rhG．CSF治疗组死亡动物较少，共进行24只动物的模型制作，死亡率为25％(18／24)。两者

5、之间的差别具有统计学意义(P<0．05)。2、神经功能评分统计：缺血再灌注24h时，Nacl组和治疗组较假手术组神经功能评分上升，表明认为神经功能下降，差异有显著性(P

6、好。小结：rhG．CSF能降低脑缺血大鼠死亡率；rhG．CSF能改善脑缺血大鼠神中文摘要经功能，说明rhG．CSF具有神经保护作用。第二部分粒细胞集落刺激因子对脑缺血再灌注大鼠自噬作用的影响目的：观察rhG．CSF治疗对脑缺血再灌注大鼠自噬的影响。方法：健康雄性SD大鼠，质量280～3209。随机分为3组：假手术组(sh锄组)，生理盐水对照(Nacl组)，rhG．CSF治疗组。每组均为6只大鼠。线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血(MCA0)模型：按Zea．Longa5分制标准评分，其中0分和4分者被剔除。动物模型缺血90min时再灌注，于再灌注开始，治疗组予rhG—CSF50“∥(kg·d)

7、，腹部皮下注射，连续5天。生理盐水对照组予等量生理盐水。治疗结束后取材。采用免疫组化法检测LC3的表达，采用W色stemblot检测、LC3II／LC3I、LAMP．2a、HSC．70的表达。结果：1、免疫组化结果：与假手术组相比，对照组及实验组大鼠的自噬蛋白LC3阳性表达高于假手术组，rhG—csF治疗组的自噬蛋白Lc3阳性表达要高于假手术组和生理盐水对照组，差异有统计学意义；2、Westemblot结果：取脑缺血灶周边区域脑组织；与假手术组