黄瓜果瘤基因tu的遗传转化研究及黄瓜无侧枝基因nlb的初步定位

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1、上海交通大学硕士学位论文学号：1101509029黄瓜果瘤基因Tu的遗传转化研究及黄瓜无侧枝基因nlb的初步定位学科专业：作物遗传育种作者姓名：任国良指导老师：潘俊松副教授蔡润教授学号：1101509029班级：B1015091日期：2013年02月万方数据MasterDissertationofShanghaiJiaoTongUniversityTheResearchonGeneticTransformationofTuberculateFruitGeneTuinCucumber(cucumissativusL.)andGeneMappingofNon-lateral-branc

2、hGenenlbinCucumber(CucumissativusL.)Specialty:CropGeneticsandBreedingAuthor:GuoliangRenAdvisor:A.Prof.JunsongPanProf.RunCaiSchoolofAgriculturalandBiologicalShanghaiJiaoTongUniversityFebruary,2013万方数据上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的

3、作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日万方数据上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期

4、：年月日万方数据上海交通大学硕士学位论文摘要黄瓜果瘤基因Tu的遗传转化研究及黄瓜无侧枝基因nlb的初步定位摘要本实验室通过前面的研究，利用图位克隆的方法克隆得到控制黄瓜果瘤性状的基因Tu，且发现Tu基因的完全缺失导致无果瘤性状的发生。生物信息学软件预测该基因编码锌指蛋白(zincfingerprotein)转录因子，为了进一步验证Tu基因的生物学功能，探究该转录因子在黄瓜转录调控中的重要作用，故对其进行黄瓜遗传转化研究。以黄瓜无果瘤品系S06苗龄子叶节为外植体，构建含有黄瓜自身启动子的黄瓜果瘤基因Tu表达载体pCAMBIA2301-Tu，将表达载体通过点击法导入根癌农杆菌菌株GV3

5、101中，进行农杆菌介导的黄瓜果瘤基因Tu的遗传转化研究。通过优化遗传转化的生根条件以及抑制农杆菌生长条件等，将生根培养中卡那霉素(Kan)浓度调至30mg/L，抑制农杆菌生长抗生素为特美汀(Ti)150mg/L+头孢霉素(Cef)100mg/L时，一定程度上提高了遗传转化的效率。580个外植体通过抗生素筛选获得的18株再生苗，通过PCR检测和测序鉴定，最终获得8株转化苗，转化效率为1.37%。以黄瓜(CucumissativusL.)无侧枝品系419(P1)和长侧枝品系SB-2(P2)为亲本，构建136株F2群体为试验材料，对黄瓜无侧枝基因nlb进行基因定位研究。田间调查和遗传分

6、析发现F2群体的表现型为长侧枝与无侧枝，χ2(χ2=0.04＜3.84)检验表明其分离比为31∶。运用分离群体分组混合分析法(bulkedsegregantanalysis,BSA),从F2中无侧枝群体和长侧枝群体中随机选取10株，分别混合其DNA，构建无侧枝和有侧枝基因池，通过分析SSR分子标记在基因池间的多态性，定位到nlb基因连I万方数据上海交通大学硕士学位论文摘要锁标记SSR10018，将nlb定位于黄瓜第一染色体。然后利用F2群体进行进一步验证，经MAPMAKER3.0软件分析，定位到距nlb基因更加紧密的分子标记SSR19673，遗传距离为15.9cM。本研究为无侧枝基

7、因nlb的精细定位和图位克隆提供良好的研究基础。关键词：黄瓜，果瘤基因Tu，遗传转化，无侧枝基因nlb，基因定位II万方数据上海交通大学硕士学位论文摘要TheResearchonGeneticTransformationofTuberculateFruitGeneTuinCucumber(cucumissativusL.)andGeneMappingofNon-lateral-branchGenenlbinCucumber(CucumissativusL.)Abstr