探析先进机场场面活动引导与控制技术研究

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯卜2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3—4文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5—14．jL．L刚吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15第一部分卵巢癌组织中Bmi一1蛋白的表达与端粒酶活性的关系材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16—25结果oolo0··ooo·omoDoQBo⋯⋯⋯．26—29讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30—31第二部分

2、组建SiRNA干扰卵巢癌OVCAR细胞株Bmi一1基因，检测其对细胞活性及端粒酶表达的影响材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32—43结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44—54讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55—57结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60—70个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯7卜72哈尔滨医科大学博士学位论文1IIllllIIllIllIIIIIllIIY1753105中文摘要目的通过检测癌基因Bmi—l与端粒酶在卵巢上皮癌中表达情况，探讨其相互之间的关系。构建SiRNA载体，通过RNA干扰技术阻断Bmi一1基因，检测对卵巢上皮癌OVCAR细胞系活性和对端粒酶的影响。方法1、应用RealTime—PCR的方法检测47例卵巢上皮癌组织中Bmi—l基因的mRNA表达情况；2、采用免疫组化SP法检测47例卵巢上皮癌组织中Bmi一1蛋白的表达；3、改良端粒重复序列扩增技术(telomeraserepeatamplific

4、ationprotocol—TRAP)TRAP银染技术检测上述卵巢上皮癌组织中端粒酶基因水平；4、WesternBlot检测卵巢上皮癌组织中端粒酶蛋白表达量：5、针对人Bmi-1基因构建SiRNA表达载体，转染卵巢癌OVCAR细胞；6、MTT检测转染后细胞活性，24小时检测一次；7、免疫荧光技术FISH证实转染情况；8、RT-PCR检测转染48小时后RNAi对Bmi-ImRNA影响；9、WesternBlot检测转染后48小时RNM对Bmi—l蛋白影响；lO、选取干扰效率最高的RNAi转染细胞；1l、MTT检测细胞活性；RT-PCR检测转染后细胞端粒

5、酶活性。结果l、Bmi-lmRNA和蛋白在卵巢上皮癌组织中较正常组织有明显表达(P<0．05)，并且与病理分级和临床分期有关，G3级阳性表达率(93．10％)高于G2级(61．11％)，II期、III期阳性表达率(66．67％)低于IV期(92．31％)，二者均有统计学差异(P

6、RNA表达完整，纯度较高，无明显降解；5、三条SiRNA中RNAi—l干扰效率最高，RT—PCR检测干扰效率为80．7％；WesternBlot检测干扰效率为70．1％；6、MTT检测细胞活性：RNAi组细胞增殖活性明显降低，细胞增殖受到明显抑制。SiRNA—l组抑制率与cell及cellnegative组抑制率相比有显著差异(P<0．05)。7、RT-PCR检测端粒酶活性结果，卵巢．卜皮痛中Bmi．1基因与端粒酶的关系OVCAR细胞端粒酶活性检测成阳性，其活性接近到人胚肾细胞系的水平。转染SiRNA一1后端粒酶活性大大降低，与对照组形成显著差异(P

7、≤0．05)。结论Bmi-I基因和蛋白在卵巢上皮癌组织中高表达，其表达率与组织学分级和临床期别相关；Bmi-I阳性率与端粒酶活性阳性率密切相关；Bmi—l基因检一测有望成为卵巢癌预后的有效指标。SiRNA-I阻断Bmi一1基因后，细胞活性及端粒酶活性均明显降低，SiRNA对卵巢癌细胞活性以及端粒酶活性有明显抑制作用。阻断细胞Bmi—l基因，能降低端粒酶活性，阻止细胞永生化进程，有望成为恶性肿瘤治疗的靶基因，为肿瘤基因治疗提供一种新的方向。关键词Bmi一1，端粒酶，卵巢癌，SiRNA哈尔滨医科人学博L学位论义ThecorrelationofBmi一1g

8、eneandtelomeraseinovaryepithelialcancerandtheinfluence