一种改进的全人源单链抗体库噬菌体展示技术的建立

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：R4单位代码：10343学号：151004691硕士学位论文论文题目:一种改进的全人源单链抗体库噬菌体展示技术的建立研究生姓名：张雨超学科专业：临床检验诊断学类型：学术型指导教师：徐建青教授张晓燕教授二〇一八年五月温州医科大学硕士学位论文论文题目：一种改进的全人源单链抗体库噬菌体展示技术的建立答辩委员会主席：潘秀珍教授答辩委员会成员：高基民教授陶然教授论文答辩日期：2018年5月26日温州医科大学硕士学位论文目录中英文缩略词对照表……………………………………………………1中文摘要………………………………………………

2、…………………2英文摘要…………………………………………………………………3前言………………………………………………………………………4材料与方法……………………………………………………………14材料一、质粒、细胞株和菌株………………………………………14二、主要试剂及材料……………………………………………14三、主要仪器设备………………………………………………15四、主要溶液及培养基的配制…………………………………15实验方法……………………………………………………………19实验结果…………………………………………………………………27分析与讨

3、论………………………………………………………………29小结………………………………………………………………………31参考文献…………………………………………………………………32致谢………………………………………………………………………34综述………………………………………………………………………35参考文献…………………………………………………………………39学位论文独创性声明……………………………………………………48温州医科大学硕士学位论文中英文缩略词对照表英文缩写英文全称中文名称FLEFusion-loopepitope融合环表位ELIS

4、AEnzyme-LinkedImmunoSorbentAssay酶联免疫吸附试验SPAStaphylococcalProteinA葡萄球菌A卵白PD-1ProgrammedDeath-1程序性死亡分子1MOPS3-MorpholinopropanesulfonicAcid3-(N-吗啉)丙磺酸PEGPolyethyleneglycol聚乙二醇TETris-EDTA三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸LBLuria-Bertani路瑞安-贝尔塔尼SBSuperBroth超级肉汤PBMCPeripheralBloodMononuclearCell外周血单个

5、核细胞PBSPhosphateBufferSaline磷酸盐缓冲液CBSCarbonateBufferSaline碳酸盐缓冲液PFUPlaque-FormingUnit噬斑形成单位1温州医科大学硕士学位论文一种改进的全人源单链抗体库噬菌体展示技术的建立中文摘要目的建立全人源单链抗体（single-chainantibodyfragment，scFv）库的噬菌体展示技术。方法收集100名未免疫健康老年志愿者每人5mL血液，全部混匀后分离B淋巴细胞，经RNA抽提、cDNA合成后以其为模板，以IgG类抗体基因为引物，PCR获得重链可变区片段（VH）和轻

6、链可变区片段（VL），然后以VH和VL为模板，经过重叠PCR获得scFv。通过sfiI酶切位点将scFv插入pComb3xss载体中，电转后得到一定容量的抗体库。加入辅助噬菌体VCSM13过夜培养，上清经PEG8000/NaCl沉淀，重悬噬菌体沉淀，即完成了噬菌体抗体库的构建。9结果成功构建了库容为2.6×10的噬菌体抗体库，并通过筛选抗流感病H1N1HA蛋白的抗体获得验证。结论我们成功建立了一种改进的构建噬菌体抗体库的技术平台，可用于各类功能抗体的筛选。关键词：中和抗体；单链抗体；噬菌体展示2温州医科大学硕士学位论文Constructionof

7、animprovedlargehumanscFvlibrarybythephagedisplaytechnologyAbstractObjictiveToestablishasingle-chainfragment(scFv)libraryusingphagedisplaytechnology.MethodsPeripheralbloodfromnon-immunizedhealthyelderlyvolunteers(n=100)wascollected,BlymphocyteswereseparatedandsubjectedtoRNAext

8、ractionfollowedbycDNAsynthesis.TheresultedcDNAwasusedasthetemplate,a