噬菌体抗体库技术及其在鸡单链抗体中的应用

《噬菌体抗体库技术及其在鸡单链抗体中的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、!"#$!""#年第!$卷第%&期!"#$%&’()*+,-’)./601:2’3.4;5.67889噬菌体抗体库技术及其在鸡单链抗体中的应用6B6陈红兵!高金燕!许杨&67食品科学教育部重点实验室中德联合研究院&南昌大学$!IIGGLK-B7南昌大学食品系$抗体工程经历过多克隆血清!单克隆抗体阶变区基因!将扩增产物重组到噬菌体载体里!并段!现发展到了基因工程抗体时代"目前!抗体工通过与丝状噬菌体的外壳蛋白形成融合蛋白!把程领域最突出的进展就是噬菌体抗体库技术的?*4段或单链抗体&(’.$)%-"*’.?@!A-?@$表达在噬建立"噬菌体抗体库技

2、术实际上是丝状噬菌体展菌体表面!然后用亲和层析的方法经过(吸附)示技术#!"#$%&’(!)*+,%-"./)/$+$与抗体组合文洗脱*扩增+的富集过程筛选出特异性抗体!最库技术#-/01’.*,/2’*)’003./$)/43)’.)’42*2+后可用大肠杆菌表达系统来表达特异性的抗,%-"./)/5+$相结合而成!该技术的出现开创了一体,条简便快捷的基因工程抗体生产路线!为基因工67B噬菌体展示技术的原理程抗体的制备提供了新途径!是抗体工程史的里67B76原理程碑!现将噬菌体抗体库技术及其在鸡单链抗体6CDE年A0’,"首次描述了噬菌体展示技

3、术’将中的应用综述如下%蛋白分子或肽段的基因克隆到丝状噬菌体的基因组F=>!与噬菌体的外壳蛋白形成融合蛋白!6噬菌体抗体库技术从而使异源分子呈现于噬菌体表面%其主要特点676噬菌体抗体库技术的操作路线是将特定分子的基因型和表型统一在同一病毒噬菌体抗体库技术的产生取决于三项实验颗粒内!即在噬菌体表面表达特定蛋白质!在噬技术的发展"第一!89:技术的发展使人们可以菌体核心F=>中含有该蛋白的结构基因%由于丝用一组引物&免疫球蛋白可变区中骨架部分的保状噬菌体易于在大肠杆菌系统中分离扩增!使这守序列$!通过反转录;89:&:<;89:$直接从总一技术将选

4、择能力和扩增能力联系到了一起!即:=>克隆出全套免疫球蛋白可变区基因%第二!通过与配体的结合从数量众多的多样化群体中噬菌体展示技术的建立!即将抗体通过与噬菌体选择出表达有相应配体的噬菌体颗粒!再通过感外壳蛋白融合表达在噬菌体表面!进而经亲和富染大肠杆菌使选择出的噬菌体颗粒得到扩增%由集法筛选表达有特异活性的抗体%它实现了基因此可见!噬菌体展示可成为有效的筛选体系!但型和表型的转换!提供了高效率的筛选系统!这是一直到6CCG年!噬菌体展示的功能才真正被人是噬菌体抗体库技术的核心%第三!大肠杆菌可们所认识!由此才开始了噬菌体抗体库技术%以通过分泌表达

5、产生有抗体活性的免疫球蛋白!67B7B丝状噬菌体展示系统的主要类型使抗体制备最终得以实现%在此三项技术的基础噬菌体展示技术中!外源蛋白能够实现基因上!噬菌体抗体库技术的操作路线变得十分便型到表型的转换!并将选择功能和扩增功能结合捷%其路线是’首先用89:方法扩增抗体全套可在一起!都与丝状噬菌体紧密相关%丝状噬菌体!基金项目’国家自然科学基金项目&IGIJGGD6$-江西省青是一单链环状F=>!有6G个基因!分别编码6G个年科学基金项目&GBIGG6J$-江西省教育厅科技项目&赣教计字蛋白质%柔性长丝状的噬菌体由外壳蛋白包裹.BGG6/IDK号$收

6、稿日期’BGGI)66)IGF=>构成!外壳蛋白主要是基因H!编码的8D蛋;!!;!"#$!""#年第!$卷第%&期!"#$%&’()*+,-’)./601:2’3.4;5.67889白!有!"##个拷贝"另外还有基因!#$%#$"和=B3B@%!该抗体库基因来源于未经免疫的供体"该%&!分别编码次要外壳蛋白’(#’)#’*#’+"从理论库代表了天然抗体在供体内的抗体谱!但亲和力上讲!外源蛋白或多肽通过融合蛋白的方式可以较低"$免疫抗体库$?@A

7、于经抗原免疫过的供体"该部分多肽主要展示在’(#’"蛋白上"在抗体库技库具有较强的抗原特异性和亲和力!但抗体的多术中!常采用的是’(#’"融合蛋白"样性低"%半合成抗体库$H9E?@A<=B3B@%!抗体重链可变区基因片段中的丝状噬菌体基因!编码外壳尾丝蛋白’(!病JKL,和JKL!来自于人胚系.+种$M基因片段!毒颗粒有./0个拷贝"基因!区有两个位点可供而JKL(则是人工合成的编码0/,0个氨基酸的随,!外源基因片段插入!即基因!氨基端$1端%或近机序列"该库库容量极大

8、!可达,#!但抗体的亲和1端可屈伸臂区内!表达的融合蛋白在辅助病毒力较低!同时人工合成的JKL(可能增加抗体的超感染后!与野生型’(蛋白