结核分枝杆菌耐药性分析及利福平和氧氟沙星耐药基因的检测

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1、硕士学位论文结核分枝杆菌耐药性分析及利福平和氧氟沙星耐药基因的检测学科专业病原生物学学位类型科学学位□专业学位研究生姓名郭婧玮导师姓名、职称袁仕善教授论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月分类号密级学校代码10542学号201202191487结核分枝杆菌耐药性分析及利福平和氧氟沙星耐药基因的检测AnalysisofresistanceinMycobacteriumtuberculosisanddetectionofgenesresistanttorifampicinandofloxacin研究生姓名郭婧玮指导教师姓名、职称袁仕善教授学科

2、专业病原生物学研究方向病原分子生物学湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月湖南师范大学学位论文原创性声明：所呈交的学位论文本人郑重声明，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的巧容外，本论文不含任何其他个人或集体臣经发表或撰写过的作品成果。对本文＾１的研究做出重要贡献的个人和集体，均臣在文中义明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年文月文著曰湖南师范大学学位论文版权使用授权书、本学位论文作者完全了解学校有关保留使用学位论文的规定，研究生在校攻读学

3、位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向国家有关部口或化构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阀和借阅。本人授权湖南师范大学可Ｌ义将本学位论文的全部或部分、内容编入有关数据库进行检索，可Ｌ义采用影印缩印或担描等复制手段保存和汇编本学位论文。：言么作者签名碟？日期：＞设争ｒ月文日。导师签名日期：炸ｒ月２＾？曰和柔摘要目的：调查结核患者中结核分枝杆菌的耐药性，分析耐药结核分枝杆菌临床分离株的rpoB、gyrA和gyrB基因的突变情况，探讨一线药物利福平、二线药物氧氟沙星的耐药产生与rpoB基因、gyrA和g

4、yrB基因突变的关系，为结核分枝杆菌（MTB）的耐药性研究、耐多药结核病（MDR-TB）和广泛耐药结核病（XDR-TB）的诊断与治疗提供新的实验依据。方法：①收集湖南省胸科医院6535例就诊的肺结核患者的标本，进行结核分枝杆菌液体培养及绝对浓度法药物敏感性实验（简称“药敏实验”，DST），检测培养菌株对链霉素（SM，S）、异烟肼（INH，H）、利福平（RFP，R）、乙胺丁醇（EMB，E）、卡那霉素（KM，K）和氧氟沙星（OFX，O）6种药物的敏感性，以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv为对照，获得菌株对6种药物的耐药谱。②选取利福平耐药菌株，用超声波裂解法提取

5、MTB基因组DNA，对与利福平耐药相关的rpoB基因进行扩增、测序并比对其突变情况，分析基因突变和耐药表型的关系。③选取氧氟沙星耐药菌株，采用超声波裂解法提取MTB基因组DNA，对与氧氟沙星耐药相关的gyrA和gyrB基因进行扩增、测序，分析该两个基因突变与耐药表型的相关性。结果：①结核分枝杆菌培养阳性1140例，初治患者826例，复治患者314例；耐药肺结核患者443例，其中耐药初治患者296例，I耐药复治患者147例，总耐药率为38.85%（443/1140），初治患者总耐药率为35.84%（296/826），复治患者总耐药率为46.81%（147/3

6、14）。耐多药患者270例，耐多药率为23.68%（270/1140），其中同时耐利福平、异烟肼和链霉素在耐多药模式中所占比例最高，达32.22%（87/270）。而单一耐药以利福平最高，耐单药率为28.51%（325/1140）。②本地区rpoB基因突变以C531T（Ser→Leu）为主，占69.64%（39/56），其中耐多药菌株有29株（70.73%），其次是发生在RRDR-526位点上的基因突变，占16.07%。③1140株阳性标本中有140株对氧氟沙星耐药，单耐药率高达12.28%，是二线药物中耐药率最高的一种药物，而在32株氧氟沙星耐药的MTB

7、中，所测的gyr基因突变共有25株,且均为gyrA基因突变，其突变率为78.1%（25/32）。gyrA基因突变株中，以94位点较为常见，占gyrA基因突变的60.0%（15/25），而在gyrB基因上均未发现突变位点。结论：①某院就诊的结核患者的结核分枝杆菌总耐药率和耐多药率分别为38.85%和23.68%。②rpoB基因的81bp耐药区域上以RRDR-531和RRDR-526两个位点上的突变为主要突变形式。③氧氟沙星耐药与gyr基因突变有一定的关系，gyrA基因突变是主要突变形式。关键词：结核分枝杆菌；耐多药结核；基因突变；利福平；氧氟沙星IIAbst

8、ractObjective:Toinvestigatetheres