epsps基因与bar基因的克隆及在蓖麻中的功能验证

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1、分类号０３５．３学校代码１０１３６ＩＣＳ２化２００００１学号￣￣￣＾＂＾＊ＣｉＩ均古氏燕大等覇ｉｉｉ象；硕±学位论文ｒ份巧凹基因与说《＊基因的克隆及在茜麻中的功能验证ＥＷＷＧｅｎｅａｎｄ此ｊｒＧｅｎｅＣｌｏｎｈｉｇａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＶｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＣａｓｔｏｒ申请人；罗蕊＾；学科专业：作物栽培学与耕作学３藝ｍＳ異？二—￣＾＿￣研究方向；作物生物技术茜ｉ山ＳＳ—：？——．？－１二三

2、１＾：子Ｊ＾二＾二＾学位类别：学术学位＾胃漂胃臺畫誦指导教师：陈永胜教授胃节ｉｉｉｇ黄凤兰教授．论文提交日期二〇—五年四月：？内蒙古民族大学硕±学位论文作者声明本人声明；本人呈交的学位论文是本人在导师指导下取得的研究成果。对前人及其他人员对本论文的启发和贡献已在论文中做出了明确的声明，并表示了感谢。论文中＋除了特别加标注和致谢的地方夕ｂ不包含其他人己经发表或撰写的研究成果。本人同意内蒙古民族大学保留并向国家有关部口或资料库送交。本人授权内蒙古民族大＾学位论文或电子版，允许论文被查阅和借阅’学可臥将本人

3、学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，。可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文、作者答名；日期：：．．．＊－．．．．．—．．—．－．－＇＾．－一．．ＶＴ，‘Ｖ心Ｉ公－．…二分类号035.3学校代码10136ICS学号201200001cDNA-AFLP技术分离蓖麻矮化相关基因SeparartionofDwarf硕士学位论文-relatedGenesofCastorbyUsingcDNA-AFLPTechnologyEPSPS基因与Bar基因的克隆及在蓖麻中的功能验证EPSPSGeneandB

4、arGeneCloningandFunctionalVerificationoftheCastor申请人：罗蕊学科专业：作物栽培学与耕作学研究方向：作物生物技术学位类别：学术学位指导教师：陈永胜教授黄凤兰教授论文提交日期：二○一五年四月摘要蓖麻（RicinuscommunisL.）是世界十大油料作物之一。目前，尚未有转基因抗除草剂蓖麻品种。本试验以蓖麻优良父本“2129”为试验材料，通过PCR扩增法，克隆EPSPS基因和Bar基因，构建植物表达载体pCAMBIA3301-Bar-EPSPS，利用农杆菌介导法将EPSPS基因和Bar基因同时转到蓖麻体内。为培育具有抗

5、除草剂的蓖麻新品种奠定基础。本试验的研究结果如下：1根据GenBank中公布的EPSPS基因序列以及重叠延伸PCR的原理，设计了19对引物，引物长度为60pb，并且相邻两个引物之间有20pb的碱基重叠，在第19对引物的两端加入酶切位点XhoI。根据Bar基因序列及重叠延伸PCR的原理，设计11对引物，引物长度为60bp，并且相邻引物之间有20bp碱基重叠，在第11对引物的两端分别添加酶切位点NcoI、BstEⅡ。采用PCR扩增法，获得EPSPS基因和Bar基因的全长序列，分别经回收、连接、转化、鉴定、测序、分析比对后，得到EPSPS、Bar基因1529bp、831

6、bp全长序列。2将表达载体质粒pCAMBIA3301线性化，用NcoI、BstEⅡ将Bar基因从克隆载体上切下，然后将二者连接，经转化、鉴定，获得pCAMBIA3301-Bar质粒。用XhoI将pCAMBIA3301-Bar线性化，将EPSPS基因从克隆载体上切下，将二者连接，经转化、鉴定，获得pCAMBIA3301-Bar-EPSPS表达载体，并确定EPSPS基因连接方向正确。3将构建好的植物表达载体pCAMBIA3301-Bar-EPSPS通过冻融法转化到农杆菌感受态EHA105中。4对蓖麻子叶节的抗草铵膦浓度进行筛选，最终确定在抗性筛选培养基中，加入0.1m

7、g/L的草铵膦时为最适浓度。5采用农杆菌介导法，将pCAMBIA3301-Bar-EPSPS对蓖麻子叶节进行遗传转化，经抗性筛选最终获得抗性植株72株。经PCR扩增检测，1株为转基因植株。关键词：蓖麻；抗除草剂；EPSPS基因；Bar基因EPSPSGeneandBarGeneCloningandFunctionalVerificationoftheCastorAbstractCastor(RicinuscommunisL.)isoneoftheworld'stoptenoilcrops.Currently,thereisnothaveatransgenicherb

8、icide