茶树中csecgt基因的克隆及其功能验证

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2、ｉ＼＼，．，－：：，ｒ，；；、－ｒ＇、－．：－？ｃｖ＾，；：，－ｖｖ；Ｖｒ－’＼Ｖ，－．＇．、‘．．ＶＶ＾分类号Ｓ５７１．１密级公开ＵＤＣ单位代码１０５３７觸斋农皮丈＃硕±学位论文茶树中ＣｓＥＣＧＴ基因的克隆及其功能验证ＣｌｏｎｉｎａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＣｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎｏｆＣｓＥＣＧ了ｇＧｅｎｅｉｎＣａｍｅｌｌｉａＳｉｎｅｎｓｉｓ研究生姓名吴敦超指导教师黄建安教授副指导教

3、师刘仲华教榜学科专业塞拳研究方向茶树栽培育种与分子牛物学论文答辩日期２饥Ｓ自仙答辩委员会主席喻所年论义评阅人舊畜潘！、苗位授予日期胃二０—五年六月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导教师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所化除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或巧一书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示

4、了谢意。口Ｓ｜研究生签名：时间：么！年月曰裏％ｉ堯！６７关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即；学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可巧用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并同意将由此产生的收益捐赠给学校教育基金会用于发展研究生教育。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：时间：雕年《月）日了指导教师签名：；时间

5、；年４月。日遣＾＾摘要摘要醋型儿茶素是简单儿茶素Ｃ环３位経基没食子弼基化的产物。己有资料表明：植物体内代谢物质的酷基化是在活性醜基供体的参与下完成的。目前在植物机体内发现有很多种活性爾基供体，能够催化物质的醜基化，如酷基硫醋化合物（ＣｏＡｔｈｉｏｅｓｔｅｒｓ）、－－５－０５０咖啡醜奎尼酸（ｃａｆｅｏｙｌｑｕｉｎａｔｅ）、没食子醜基葡萄糖（１－－－Ｄ－ｃｏｓｅ０ｇａｌｌｏｙｋ３ｇｌｕ）。（－－－－－－表儿茶素没食子醜基转移酶（ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｉＫｌＯｇａｌｌｏｙｌ

6、ｐＤｇｌｕｃｏｓｅ－ＯｇａｌｌｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＥＣＧＴ）能够在植物体外催化简单儿茶素合成醋型儿茶素。但在茶树（Ｃａ／ｗｅ化地任Ｑ底《似ｚｅ）中，证明该反应存在的证据还不清楚。茶树（Ｃｃｗｗｅ航ｔ’ｗｎｅ／ｗｂ件中存在醋型儿茶素的水解酶。合成与水解反应的同时进行，很难判断ＥＣＧＴ就是茶树体内醋型儿茶素合成的关键酶。本研究通过ＣｓＥＣＧＴ的原核表达、ＣｓＥＣＧＴ序列分析、过表达载体的构建、ＥＣＧＴ的表达与提取、ＥＣＧＴ的功能验证等实验，获得了如下结果：－ＥＴ－１ＣｓＥＣＧＴ原：Ｅ

7、Ｔ２８ＥＣＧＴ／３２ＥＣＧＴ重组大厮．成功构建了两个核表达系统Ｐｐ一－杆菌。经过系列的优化表达条件的探索，包括ＳＤＳＰＡＧＥ蛋白检测、酶纯化手段、生物转化、高效ＨＰＬＣ，都没有得到显著的实验结果。一２．分析了ＣｓＥＣＧＴ的基因序列４４３；全长为１７２６ｂｐ，其包含个完整的编码区１ｂｐ，’５非翻译区（ＵＴＲ）７２ｂｐ，３啡翻译区１８０ｂｐ和ｐｏｌｙＡ尾己３１ｂｐ，编码区ＧＣ含量为５１．８３％４８０个（ｓｔ，编码氨基酸组成的蛋白表儿茶素没食子酷基转移酶）。通过ｂｌａ软件在线比较

8、分析，发现ＣｓＥＣＧＴ编码的氨基酸序列与其它物种的丝氨酸酷基转移酶一（Ｓｅｒｉｎｅａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）具有较高的致化尤其与来玉米Ｚｅａｗｆｌ、潘那利番茄（［灿’Ｃ■腑）、蝶豆化ｏｎａｔｅｒｍｓ化ａ的丝氨酸敵基转移酶的相似性达４０％Ｗ上。（）３－－．成功构建了ＥＣＧＴ过表运载体ＣＸＳＮＥＣＧＴ、对照空载ＣＤＧＣＣＤＢｐ体ｐ，并将其转入到农杆