jmjd1c对牛卵丘细胞增殖与凋亡的影响

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1、JMJD1C对牛卵丘细胞增殖与凋亡的影响EffectofJMJD1Concumuluscellproliferationandapoptosisofcattle作者姓名：徐芳芳专业名称：动物遗传育种与繁殖指导教师：张嘉保教授学位类别：农学硕士答辩日期：2015年6月3日中文摘要JMJD1C对牛卵丘细胞增殖与凋亡的影响卵丘细胞作为颗粒细胞的一种，其在卵母细胞成熟过程中的扩张状态以及凋亡比率对卵母细胞的成熟具有重要作用。已有研究表明，BMP15、IGF-I与FSH均可影响其增殖、生长与分化，从而影响卵母细胞正常生长和成熟。JMJD1C是KDM3家族中的一员，其中KDM3A、KDM3B即J

2、MJD1A、JMJD1B能够特异去除H3K9me1与H3K9me2的甲基化修饰，但JMJD1C是否也具有对H3K9的催化作用或活性，且在BMP15、IGF-I、FSH介导下对卵丘细胞增殖与凋亡的影响则罕有报道。为明确JMJD1C对H3K9的去甲基化作用，本研究在对牛卵丘细胞进行体外培养后，利用RNAi方法抑制JMJD1C的表达，并通过免疫荧光方法检测H3K9me1、H3K9me2的表达变化。结果表明：对牛卵丘细胞中JMJD1CmRNA表达成功地进行抑制后，H3K9me1、H3K9me2表达量无明显变化，即JMJD1C对去除H3K9me1与H3K9me2的甲基化修饰均并无明显作用。为检

3、测BMP15、IGF-I和FSH对JMJD1C表达的影响，分别在培养液中添加不同浓度BMP15、IGF-I和FSH并检测JMJD1C的表达变化，实时荧光定量PCR结果表明，添加FSH和IGF-1对JMJD1C的mRNA表达水平无显著影响；而50ng/ml与100ng/ml的BMP15添加会显著降低JMJD1C的mRNA表达水平（p﹤0.01）。MTS细胞增殖检测结果也表明，BMP15的添加量为50ng/ml时，可明显促进卵丘细胞增殖，即BMP15的添加浓度为50ng/ml时显著抑制了JMJD1C的表达并促进了卵丘细胞增殖。因此进一步选取添加量为50ng/mlBMP15探究JMJD1C

4、在BMP15介导下对卵丘细胞凋亡与增殖的影响。基于以上结果，利用siRNA敲减JMJD1C基因的表达，同时从mRNA水平和蛋白水平检测凋亡标记基因Bcl2和Bax表达量变化。实时荧光定量PCR与WesternBlot结果均表明，BMP15添加后沉默JMJD1C基因，凋亡标记基因Bcl2与Bax的比值都明显升高，即卵丘细胞的凋亡率降低。表明了BMP15与JMJD1CI之间的间接联系可以影响卵丘细胞的凋亡，JMJD1C可抑制卵丘细胞中BMP15介导的抗凋亡作用。综上所述，本研究明确了牛卵丘细胞中JMJD1C在mRNA水平上不具有直接调控组蛋白H3K9me1、H3K9me2的去甲基化作用，

5、而JMJD1C可影响BMP15在牛卵丘细胞中介导的抗凋亡作用。研究结果有助于识别KDM3密切相关的蛋白质之间的差别，对JMJD1C的功能进行了新的探究并为揭示卵丘细胞凋亡的分子机制提供一定基础。关键词：JMJD1C；牛卵丘细胞；去甲基化；细胞增殖与凋亡；BMP15IIAbstractEffectofJMJD1ConcumuluscellproliferationandapoptosisofcattleCumuluscells,asakindofgranulosacells,itsexpandedstatesandapoptosisratiosimpactoocytesmaturati

6、onandembryonicdevelopment.BMP15,IGF-IandFSHcanpromotegranulosacellproliferation,growthanddifferentiation,contributingtothenormalmaturationofoocytes.JMJD1CisamemberofKDM3families.JMJD1AandJMJD1B(KDM3A,KDM3B)canremoveH3K9me1andH3K9me2methylationmodificationspecifically,HoweverwhetherJMJD1Calsohas

7、aH3K9catalyticactionisunclearanditseffectoncumuluscellapoptosisandproliferationmediatedbyBMP15,IGF-IandFSHisstillrarelyreported.InordertoclarifytheroleofJMJD1C’sactionofH3K9demethylation.Afterbovinecumuluscellsculturedinviro,weuse