mdial在晚期糖基化终产物介导的内皮细胞通透性增高中的作用

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1、分类号级密ＵＤＣ编号讀讀似／爹硕壬学位论文ｍＤｉａｌ在晚期糖基化终产物介导的内皮细胞巧透性増离中的作用ｔ－ＥｆｆｅｃｏｆｍＤｉａｌｏｎＡｄｖａｎｃｅｄＧｌｃａｔｉｏｎＥｎｄＰｒｏｄｕｃｔｉｎｄｕｃｅｄｙｈｙｐｅｒｐｅｒｍｅａｂ化ｔｙｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ周晚燕导师巧名黄巧冰教巧专化名巧巧理学与巧理生理学培养类型学术型论文巧交日期２０１５年４月２０日南方医科大学２０１２级硕±学位论文ｍＤｉａｌ在晚

2、期糖基化终产巧介导的内皮细胞通巧做ｉ宙中的作用ＥｆｆｅｃｔｏｆｍＤｉａｌｏｎＡｄｖａｎｃｅｄＧｌｙｃａｔｉｏｎＥｎｄＰｒｏｄｕｃｔ－ｉｎｄｕｃｅｄｈｙｐｅｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ课题来源：国家自然科学基金（３０９７１２０１，８１１７０２９７，８１３７０２２６３１３００９５０），学位申请人周晓燕导师姓名黄巧冰教授专业名称病理学与病理生理学培养类型学术型培养层次硕壬所在学院基础医学院２０１５年４月２

3、０日广州硕去学位论文ｍＤｉａｌ在晚期糖基化终产物介导的内皮细胞通透性増高中的作用硕古研巧生：周晓燕指导教师：黄巧冰巧要晚期糖基化终产物（ａｄｖａｎｃｅｄｌｃａｔｉｏｎｅｎｄｒｏｄｕｃｔｓＡＧＥｓ）ｇｙ，是蛋白质赖氨ｐ酸的氨基和还原糖的酵基之间发生非酶性糖基化反应，形成ＳｃｈｉｆｆＭ，经Ａｍａｄｏｒｉ反应并重排后形成相对稳定终产物的总称。ＡＧＥＳ与糖尿病及其并发症的发生发展密切相关，尤其是在血管通透性中起着重要作用，本实验室前期工作己证实ＡＧＥＳ通过与其特异

4、性受体ＲＡＧＥ结合，通过氧化应激等信号转导机制，影响肌动蛋白的组构及内皮细胞巧依赖性粘附蛋白ＶＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ结构形态的改变，引起内皮细胞收缩，导致内皮细胞通透性増髙，从而导致血管通透性増高。Ｄ■—ｉａｐｈａｎｏｕｓ相关成蛋白（Ｄｉａｐｈａｎｏｕｓｒｅｌａｔｅｄｆｏｒｍｉｎｓ，ＤＲＦ）族成员因具有—ＰａｓｅＧＢＤｂｉｎｄｉｎｏｍａｉｎ两个特殊的功能结构域，ＧＴＰ酶结合结构域（ＧＴｇｄ，）Ｄｉａｈａｎｏｕｓ自调节结构域（Ｄｉａｈａｎｏｕｓ，ｔｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｄｏｍａ和ｐｐａｕｙ

5、ｉｎ，ＤＡＤ）而被划ｆｏ一分为ｒｍｉｎｓ家族的个亚类，广泛分布于从酵母到哺乳动物等各种真核细胞中，ｍＤ一ｉａｌ是其中的员，之前研充证明该亚家族对细胞熟附、运动、胞质的分裂、形态的发生、细胞极性的形成、血清反应因子的激活等起重要调控作用，而近期有研巧显示，ｍＤｉａｌ的ＦＨ１段可Ｗ与ＲＡＧＥ胞浆段结合，在转化的细胞株中，ＲＡＧＥ配体介导的细胞迁移是需要ｍＤｉａｌ参与的：另外，在配体刺激下，ＲＡＧＥ可通过与ｍＤｉａｌ相互结合并引发氧化应激从而参与也血管疾病的发生发展。本实验室前期己证实的

6、ＡＧＥＳ通过与ＲＡＧＥ结合，进而通过氧化应激等信号转导机制影响ＶＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ结ＲＡＧＥ与氧化应激之间构形态的的改变，但没有直接作用关Ｉ中文巧要系。据此我们推测，ＡＧＥＳ通过其配体ＲＡＧＥ结合激活ｍＤｉａｌ，并进而引发氧化应激导致下游相应信号分子活化，最终介导ＨＵＶＥＣｓ通透性增高。研巧目的：本研究旨在阐明ｍＤｉａｌ是否参与ＡＧＥＳ介导的ＨＵＶＥＣｓ通透性增高，并探讨其具体机制。方法：实验中主要的研巧对象为人巧静脉内皮细胞（ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎ

7、ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｃｅｌｌｓＨＵＶＥＣｓ）。采用原代分离、细胞培养、免疫印迹、免疫巧光、ｌ，流式细胞术、转染质粒、腺病毒、跨内皮细胞电阻测定同时应用、ｓｉＲＮＡ干扰Ｆ打Ｃ标记的右旋糖酌检测通透性等方法，观察ＡＧＥＳ刺激下ＨＵＶＥＣｓ氧化应激ｒｃ稱酸化水平－ｒｉｎ憐水平、酪氨酸激酶Ｓ、内皮细胞巧依赖性粘附蛋白ＶＥｃａｄｈｅＶＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ分布变化等情况酸化水平Ｗ及。ＡＧＥ（ＡＧＥ－ｍｏｄｅｄｂｏｖｎｅｓｅｍｍａ修饰的牛血清白蛋白ｉｆｉｉｌｂｕｍｉｎＡＧＥｓ），由牛血清白蛋白Ｄ

8、－葡萄糖共解育８周制得。原代分离人麻静脉内皮细胞ＨＵＶＥＣｓ并于体外培养，接种于３．５ｃｍ、６ｃｍ、１０ｃｍ培养皿、微孔小皿（ｐｅｔｒｉｄｉ浊）、双层通透的培养皿（ｔｒａｎｓｗｅｌｌ）顶层小室微孔膜上（直径６．５ｉｍｎ，化括大小０．４大２ｈ小），待细胞长至融合或接近融合时，换无血清培养基继续培养，使细胞获得同步生长，然后按实验分沮分别处理备用。构建ＲＡＧＥ