o型fmdv衣壳抗原的耐酸改造及其在昆虫细胞中的表达

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1、论文编号:中囯农业科学院O型FMDV衣壳抗原的耐酸改造及其在昆虫细胞中的表达Acid-ResistantModificationandExpressioninInsectCellsofOTypeFMDVCapsidAntigen硕士研宄生：解银丽指导教师：李志勇副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：兰州兽医研宄所研宄生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过

2、的研宂成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生签名：^t$时间：w/r年上月/i"曰关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研宄生签名：g时间：vU/t

3、年f月斤曰导师签名•.时间：>5//■年r月/J日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目0型FMDV衣壳抗原的耐酸改造及其在昆虫细胞中的表达动物疫苗及论文作者解银丽专业预防兽医学研宄方向其分子免疫兰州兽医研究所指导教师李志勇副研宄员培养单位（研宄所）硕（博）姓名职称单位专业签名导师评胡永硕导口甘肃农业大学动物医教授预防兽医学浩博导0学院阅殷相副研宄硕导囪中国农业科学院兰州预防兽医学人平员博导口兽医研宄所答辩主席雜林觀硕导0^甘粛农业大学动物医预防兽医学博导口学院陈轶硕导S/西北民族大学生命科教

4、授预防兽医学博导口学与工程学院张志硕导口中国农业科学院兰州研宄员预防兽医学东博导M兽医研究所答硕导sf中国农业科学院兰州张强研宄员预防兽医学博导口兽医研宄所辩窦永副研宄硕导sf中国农业科学院兰州预防兽医学喜员博导口兽医研宄所委硕导口博导□员硕导口博导口硕导口会议记录（秘书）杨洋论文答辩时间地点2015年5月13日于兰州兽医研宄所综合楼三楼会议室Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationAcid-ResistantModificationa

5、ndExpressioninInsectCellsofOTypeFMDVCapsidAntigenM.S.Candidate：XieYinliSupervisor：AssociateProf.LiZhiyongDegree：MasterofVeterinarianSpecialty:VeterinarianMay2015摘要口蹄疫(Foot-and-mouthdisease,FMD)是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)引发牛、羊、猪等偶蹄动物易感染的一种动物疫病，其传播

6、速度快、感染率高，被世界动物卫生组织（OfficeInternationalDesEpizooties,OIE）列为必须上报的传染病，被我国列为一类动物传染病。接种疫苗是FMD防控最为有效的措施，在控制FMD暴发的过程中,FMD灭活疫苗起到了极为重要的作用，但其在生产的过程中需要大量增殖FMDV强毒，存在散毒的风险。据报道，FMDV空衣壳蛋白75S具有与完整FMDV146S粒子非常相似的抗原特性，可以引起与完整FMDV病毒粒子极其相似的免疫反应，而且病毒空衣壳不含核酸成分，安全性好，不存在散毒风险。因此，研制FM

7、DV空衣壳疫苗显得极为重要。为筛选与O型FMDV衣壳酸敏感性相关的位点，通过突变相关酸敏感性位点以提高衣壳蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统（Bac-to-Bacbaculovirusexpressionsystem）中的表达量，以研制出基因亚单位疫苗。本研究以牛源O型FMDVON株为研究对象开展耐酸性毒株的筛选工作,通过给予pH6.0酸性环境连续诱变，筛选获得6株耐酸性毒株。将诱变病毒与亲本病毒衣壳蛋白编码区P1区序列比对后在6株耐酸毒株P1区发现6个6株共有的核苷酸突变，即存在于VP3上的错义突变A4

8、60C和G462A(K154Q)及存在于VP1上的错义突变A121G(K41E)、A74G(Q25R)和A253G、A254C(N85A)。然后以质粒pMD19-P12A3C为模板，扩增出编码O型FMDV衣壳蛋白前体P12A及其蛋白酶3C的P12A3C基因,插入至杆状病毒转移载体pFastBacDualPH启动子下,并做上述6个酸敏感TM性位点的突变，构建出重组转移载体p