tirc7在急性移植物抗宿主病中的作用研究

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1、分类号：R392.4单位代码：10312密级：公开学号：20122085博士学位论文题目：TIRC7在急性移植物抗宿主病中的作用研究研究生：朱锋指导教师：徐开林教授学科专业：血液病学学院名称：南京医科大学第一临床学院完成时间：二O一五年三月南京医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本

2、人承担。作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请务必在以下相应方框内打“√”）：1、保密□，在年解密后适用本授权书。2、不保密□。作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日目录中文摘要………………………………………………

3、…………………………1英文摘要…………………………………………………………………………3前言………………………………………………………………………………6第一部分TIRC7在急性GVHD中作用的临床研究…………………………111.材料……………………………………………………………………112.方法……………………………………………………………………203.结果……………………………………………………………………304.讨论……………………………………………………………………405.小结……………………………………………………………

4、………43第二部分TIRC7在急性GVHD中作用的体内外研究………………………441.材料……………………………………………………………………442.方法……………………………………………………………………493.结果……………………………………………………………………684.讨论……………………………………………………………………1045.小结……………………………………………………………………108结论………………………………………………………………………………109参考文献……………………………………………………………………

5、…110文献综述………………………………………………………………………121附录…………………………………………………………………………143攻读博士学位期间发表论文、获得课题及参加学术会议等………………146致谢………………………………………………………………………………148南京医科大学博士学位论文TIRC7在急性移植物抗宿主病中的作用研究摘要目的：探讨TIRC7与急性GVHD的相关性及TIRC7分子在急性GVHD发生发展中的作用和可能的机制。方法：(1)分别获取急性GVHD患者治疗前后的外周血血浆及单个核细胞等样本，通过酶联

6、免疫吸附试验(ELISA)及实时定量聚合酶链式反应(q-PCR)等方法，检测TIRC7及CTLA-4在急性GVHD患者治疗前后的指标变化，明确TIRC7及CTLA-4与急性GVHD的相关性。(2)应用流式细胞术及蛋白印迹(Westernblot)等检测手段，选择急性GVHD患者淋巴细胞作为靶细胞，采用质粒构建及电穿孔等方法，观察TIRC7对CTLA-4的调控、T细胞活化及其对细胞因子分泌等的影响。(3)以SPF级C57BL/6鼠为供鼠，BALB/c鼠为受鼠，参照本实验室成熟的建模方案建立小鼠急性GVHD模型。腹腔注射TIRC7及C

7、TLA-4单克隆抗体，并观察在小鼠急性GVHD模型中，TIRC7及CTLA-4对T细胞活化及急性GVHD的影响。结果：(1)我们应用RT-PCR及westernblot方法检测到急性GVHD患者TIRC7及CTLA-4的表达。ELISA及q-PCR方法发现急性GVHD患者TIRC7表达较正常人升高，在治疗后28d，其表达均有不同程度下降，且其表达水平与急性GVHD严重程度呈正比；急性GVHD患者CTLA-4表达下降，在治疗后28d，其表达均有不同程度回升，且其表达水平与急性GVHD严重程度呈反比。(2)下调TIRC7表达后，CTL

8、A-4的表达下降，STAT3荧光素酶报告基因质粒的荧光素酶活性显著下降，STAT3磷酸化程度降低；上调CTLA-4表达，TIRC7表达变化不明显，STAT3荧光素酶活性显著升高，STAT3磷酸化程度升高。上调CTLA-4表达可显著抑制T细胞活化，I