记忆性T细胞在移植物抗宿主病中的作用的动物模型的建立-论文.pdf

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1、现代实用医学2014年5月第26卷第5期·589·[4】于晓静，李春阳．红皮病性银屑病52例合阿维A治疗红皮病性银屑病分析【J】．andalocusonchromosome6p[J]．JInvest临床分析⋯．临床皮肤病杂志，2006，35中国皮肤性病学杂志，2009，23(4)：254．255．Dermatol，1998，110(6)：958960．(8)：494．495．【6】BurdenAD，JavedS，BaileyM，eta1．收稿日期：2013．10．14[5】韩科，龙福泉，蒙秉新．复方甘草酸苷联Gen

2、eticsofpsoriasis：paternalinheritance(本文编辑：钟美春)记忆性T细胞在移植物抗宿主病中的作用的动物模型的建立张萍，王椿【摘要】目的探讨记忆T细胞在移植物抗宿主病(GvHD)中的作用。方法用BALB／c小鼠致敏C57BL／6小鼠，8周后从C57BL／6小鼠分选出CD62L一记忆性T细胞移植给BALB／c受鼠，比较CD62L初始T细胞与CD62L一记忆性T细胞引起GVHD的能力差异。结果接受CD62L~)J始T细胞回输的受鼠35d内全部死亡；接受CD62L一记忆性T细胞回输的受鼠10

3、0d内存活率为89％：接受CD62L+．与CD62L一混合细胞回输的受鼠100d内存活率为4％，生存分析结果显示CD62L与CD62L一受鼠组间生存率差异有统计学意义(P<0．O1)，CD62L一受鼠组与全骨髓移植组问生存率差异无统讨‘学意义(P=-0．337)。第7天体质量变化CD62L一受鼠组相比于CD62L受鼠组差异有统计学意义(P

4、型doi：10．3969~．issn．16710800．2014．05．047【中图分类号】R733【文献标志码】A【文章编号】1671．0800(2014)05．0589．02异基因造血干细胞移植为很多恶性培养基(Gibco)；胎牛血清(FBS，Sig．兔补体(Cedarlane)的细胞毒性培养液血液病患者提供了治愈的希望Ⅲ，然而干ma)；牛血清白蛋白(BSA，Sigma)：红细中，37℃孵育1h，离心洗2遍后细胞讨细胞移植后经常发生的移植物抗宿主病胞裂解液(ACK，实验室配置)；流式红细数，待用。此种方法得到的

5、骨髓细胞含(GVHD)严重影响了患者的生活质量，胞裂解液(BD)；4％台盼蓝母液(s．有少于0．08％的成熟T细胞。如何减轻甚至避免GVHD已经成为目ma)；T细胞分选试剂盒(Miltenyi)；兔血1．4流式分选抗原特异性T细胞前移植免疫研究的重点。本实验拟建立清补体(Cedarlane)；细胞毒性培养液BALB／c小鼠致敏的C57BL／6小鼠经颈抗原特异性记忆T细胞动物模型以用来(RPMI+0-3％BSA)等。椎脱臼处死后去除脾脏并研磨破粹获取评估抗原特异性记忆性T细胞在GVHDl-2抗原特异性记忆性T细胞供鼠

6、的准脾细胞。裂解红细胞后采用T细胞分选中的作用，报道如下。备BALB／c小鼠经颈椎脱臼处死后取出试剂盒获得纯化的T细胞，再经免疫磁脾脏，研磨破碎并裂解红细胞，洗涤离心珠分选，以CD45CD3射门，获得1资料与方法后获得的脾细胞经2000cGY照射去除CD62L初始T细胞亚群与CD62L_。记1．1材料受体鼠为SPF级近交系增殖能力，腹腔注射至C57BL／6小鼠体忆T细胞亚群。BALB，c(H．2d)d,鼠，雌性，8～12周龄；内，8周以后致敏C57BL／6小鼠即准备好。1．5实验分组根据T细胞种类设计4供体为SPF

7、级近交系C57BL／6(H．2b)1I3供鼠去T细胞骨髓和对照组脾细组动物，分别为去T细胞骨髓移植组，骨小鼠，雌性，6～8周龄；均购白中科院胞的准备取6～8周C57BL／6小鼠髓细胞+CD62L一记忆T细胞亚群移植上海实验动物中心。所有抗体除特殊说两侧股骨、胫骨及肱骨，盛于50ml完全组，骨髓细胞+CD62L初始T细胞亚群明外均购自BD公司，包括抗CRPMI培养基的培养皿中，用1ml注射移植组，骨髓细胞+混合T细胞移植纽。D62LFITC(克隆MEL．14)，抗CD45APC．器吸取培养基，冲出骨髓，制备骨髓细胞1

8、．6异基因骨髓移植GVHD模型的建cy7(克隆30F11)，抗CD3PE．cy5(克隆悬液离心后弃去上清，按照1xl07／ml浓立BALB／c受者小鼠首先接受10．5GY145．2C11)；此外实验还使用RPMI1640度重悬于细胞毒性培养液中，按照每致死量照射，随后经尾静脉回输1×10’去作者单位：315010宁波，宁波市第一医1xl0细胞加入抗．Thy1