基于issr标记的华石斛遗传结构分析

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1、学校代码：学号：分类号：密级：海南大学硕士学位论文题目：基于标记的华石斛遗传结构分析作者：郑云柯指导教师：宋希强教授专业：风景园林时间：二一五年五月GeneticanalysisofDendrobiumsineme(Orchidaceae)basedon1SSR，海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人声明：所呈交的学沪论文是本人在导师的指导下独立进打研究工作所取得的成果《除文屮已经注明引闻的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己羟发衷或撰写过的作品或成果对本文的研究做出；要献的个人和奐体，均已在文屮以明确方式标明。本串明的

2、法律结果由本人承担。论作酋签名明学位论文版权使用授权说明如人允全了解海南人乍关于收集，保存，使用学位论文的规定即：学校行权保谢并向国家打关部或机构送交论文的复印忭和屯子钣，允许论文被阅和借海《学校岈以为存在馆际合作关系兄弟高校用户提供文献传递务和交换服务本、授权為南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进检索可以采彰印、缩印或扫描等制手段保存和汇本学位论文论文在解密后遵此定论文作者签名导师签名期：年明年本人已妗认處阅读岛校学位论文全文数据库发布桿”，间息将本人的位论文提交高校学位论文全文数据库”屮全文发布，并可按‘‘章程”屮規

3、定享受相关权益》同意论文提交后滞后：口节年；口二年发而。论文作签名：年■视〒分摘要华石斛，海南特有种。在我国，仅分布于海南岛海拔以上的山地疏林中的树干上。近年来由于人类活动逐渐活跃以及地理因素导致的生境片段化，华石斛的生境受到了较为严重的破坏，选择合适的居群进行保护已经迫在眉睫。随着分子生物学的发展，分子标记技术因其较高的稳定性、丰富的信息量及不同类群间广泛的可比性等优点，突破了形态学标记、细胞学标记等表达型标记的限制，为居群遗传学的研究提供了优良可靠的分子手段。在前人研究中并未有人专门针对华石斛进行过遗传多样性分析，本研究中通过分子标记

4、的方法得到遗传多样性较高的居群，再根据各个居群的环境对不同居群的华石斛进行有针对性的进行保护工作。本研究采用简单重复序列区间（—种分子标记技术研究位于海南岛的霸王岭、尖峰岭、五指山、黎母山、鹦哥岭、佳西保护区及吊罗山共计个华石斛自然居群的遗传多样性水平及其遗传结构，并且对不同因素下的华石斛进行分析，希望通过分子水平对华石斛自然居群的遗传多样性进行研究，从而对华石斛保育工作提出意见。主要研究结果如下：使用改良、改良和改良三种提取方法提取华石斛鲜样中的基因组，结果表明改良法对华石斛鲜样的提取效果最好，提取出的纯度最高、且满足后续分子实验要求。

5、通过筛选从条通用引物中选出条扩增效果最好且条带较多的引物对个华石斛自然居群的样本进行扩增。结果表明霸王岭东五、霸王岭石峰、五指山二峰、鹦哥岭个自然居群具有较高的遗传多样性，说明这个居群具有很强的竞争力和生存力，当环境发生变化时能够很快适应并生存下来。而尖峰岭黑岭、尖峰岭二峰、黎母山个自然居群的遗传多样性较低，所以这个居群的生存力和竞争力较弱，当环境发生改变时，这个居群内的个体更容易灭亡从而导致居群的衰退。将分子标记的结果使用软件进行分析显示，华石斛个自然居群的遗传分化有发生在居群内部，发生在居群间，得到的结果与分析得到的结果基本一致，使用

6、分析华石斛个自然居群的遗传分化有发生在居群内部，发生在居群间。因此得出结论，华石斛的遗传分化主要发生在居群内部，少部分遗传分化发生在居群间。使用分子标记对华石斛个自然居群进行研究，结果显示华石斛个居群的基因流为，大于，结果表明：个华石斛自然居群间存在基因流，且基因流能防止居群间产生隔离，防止居群间分化。用对分标记的结果进行聚类，结果显示：尖峰黑岭（和尖峰二峰（、黎母山（和鹦哥岭（、五指山一峰（和五指山二峰（、霸王岭东五（和霸王岭石峰分别聚类在一起，聚类结果与分析的遗传距离结果一致。根据华石斛的附生高度、宿主、居群海拔个因素分别对华石斛的遗

7、传多样性进行分析，得到结果：附生在桃金娘科、杜鹃花科、山茶科个科上的华石斛具有较高的遗传多样性；附生在宿主高度区间内的华石斛具有最高的遗传多样性；海拔在范围内的华石斛居群具有较高的遗传多样性。对于华石斛的保育措施要着重保护华石斛居群的生境连续性，当由于自然灾害导致的生境片段化可以通过人为传粉帮助华石斛产生有效基因流。对华石斛的保育工作最重要的在于保持华石斛各个居群间的基因流，有效的基因流能够防止居群间遗传分化。关键词：华石斛；分子标记；保育；遗传结构AbstractDendrobiumsinense(Orchidaceae)，，，Dend

8、robiumsinense,，，，；目录前言居群遗传学简史居群遗传结构居群遗传多样性顿理论基因流种群瓶颈遗传漂变兰科石斛属植物遗传多样性研究分子标记的优点常用的分子标记技术分子标记的选择分子标