抗痩素纳米抗体的筛选及制备

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1、＇犬？ｉｔ嫂大家ＤＡＬＩＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ工酲硕士芽位记文ＭＡＳＴＥＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＶ％＿抗痩素纳米抗体的傭选及制备工程领域生赞玉竺作者姓名Ｍ楚舅贺後云教£指导教师答辩曰期专业学位硕士学位论文抗痩素纳米抗体的简选及制备Ｔｈｅ－ＢｉｏａｎｎｉｎａｎｄＰｒｅａｒａｔｉｏｎｏｆＮａｎｏｂｏｄｉｅｓａｎｔｉＬｅｔｉｎｐｇｐｐ作者姓名：陈洁零工程领域：生物工程学号：３１３１８０３０指导教师：贾凌云．

2、完成日期：２０１５５大遠理工大摩ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩ大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中巳经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体巳经发表的研究成果，也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果一。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均巳在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论文题目：Ｉ作者签名：髮日期：年月Ｕ日大越工大学专

3、业学位硕士学位论文摘要一瘦素是种与能量代谢、免疫、生殖等相关的多功能细胞因子，其在血液中的含量异常会导致肥胖、营养不良、心血管疾病、肿瘤、肝病等多种疾病，特别是终末期肾衰患者广泛存在瘦素水平过高的问题、胰岛素抵，由此导致肾衰症患者营养不良、高血压抗等并发症，这些并发症严重影响了患者的生活质量，因此开发特异性抗体实现瘦素水平的检测与去除将具有非常重要的临床意义。纳米抗体由于其诸多优良特点，成为该方面研究的最佳选择。获得足够量的抗原是进行抗体蹄选的前提，由于血液中瘦素含量较低，本论文首先进行了瘦素的制备，然后进行抗体的蹄选。论文研宄内容

4、如下：（１）－瘦素制备。根据人瘦素氨基酸序列，构建了原核表达载体ｐＥＴ２３ａｌｅｐｔｉｎ，优°化后的表达条件：活化的菌体以１％转接到新鲜培养基后，恒温摇床３７Ｃ连续培养８ｈ，期间不加入、ＩＰＴＧ？瘦素以包涵体形式存在于大肠杆菌中，通过包涵体的洗漆、溶解复性、强阴离子交换色谱５％的重组人。，最终获得纯度９瘦素蛋白（２）纳米抗体筛选。通过五轮蹄选，从瘦素免疫睡菌体库和非免疫库中分别得到一１８种和５种特异性纳米抗体序列，因有序列重复，最终得到２２种。经Ｅｌｉｓａ方法检测，选取其中结合活性较高的６种进行后续表达纯化。（３）纳米抗体表达。利用ＰＣＲ

5、、双酶切等手段构建６种纳米抗体的表达载体，转／／ｆｌｅＴ７进行表达。除纳米抗Ａ５、入宿主菌￡．ＣＯＳｈｕ体Ａｌｌ表达量较低外，纳米抗体Ａ１２、Ａ２３、Ａ３３和Ｂ１表达量均可占总蛋白３０％。选择Ａ５、Ａ３３进，且有可溶性表达行表达纯化，得到纯度达９０％的纳米抗体。经Ｅｌｉｓａ检测对瘦素有结合活性。关键词：瘦素；唾菌体筛选；蛋白纯化；纳米抗体－－Ｉ抗瘦素纳米抗体的蹄选及制备Ｔｈｅ－ｔｉＢｉｏａｎｎｉｎｇａｎｄＰｒｅａｒａｔｉｏｎｏｆＮａｎｏｂｏｄｉｅｓａｎｔｉＬｅｎｐｐｐＡｂｓｔｒａｃｔｌｔｉ－ｅｉｅｒｏｅｉｎｈｏｒｍｏ

6、ｎｅｓｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎＬｅｔｉｎｉｓａｋｉｎｄｏｆｍｕｔａｒｇｔｏｒｇａｎｖｅｒｓａｔｌｔ．Ｉｔｅｎｅｒｐｐｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｔｈｅｉｍｍｕｎｅ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｏｔｈｅｒｈｙｓｉｏｌｏｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｈｕｍａｎｂｏｄ．Ｔｈｅｐｇｙａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓｏｆｌｅｔｉｎｌｅｖｅｌｉｎｔｈｅｂｌｏｏｄｃａｎｌｅａｄｔｏｏｂｅｓｉｔｏｒｍａｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｐｙ，ｅｄｎｄ－ｄｉｓｅａｓｅｃａｎｃｅｒｌｉｖｒｉｓｅａ

7、ｓｅａｏｔｈｅｒｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｅｎｄｓｔａｅｒｅｎａｌｆａｉｌｕｒｅａｒｅｉｎ，，ｇｌｏｗｅｒｇｌｏｍｅｒｕｌａｒｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｒａｔｅ，ａｎｄｔｈｅｒｅｍｏｖａｌｏｆｌｅｐｔｉｎｉｎｔｈｅｂｏｄｙｒｅｌｉｅｓｍａｉｎｌｙｏｎｒｅｎａｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｓｏｍｏｓｔａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｉｈｌｅｔｉｎｌｅｖｅｌｓｉｎｔｈｅｂｌｏｏｄｗｉｌｌｈａｖｅｃｏｍｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆ，ｐｇｐｐｍａｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，ｈ