稻曲病菌田间孢子快速检测及遗传多样性研究

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1、分类号：Ｓ４３２１：１０３６４．单位代码１２７２０密级：学号：０５０签徵卷必义ｆ学位论文橋曲病菌田间抱子快速检测及遗传多样性研究ＴｈｅＲａＤｅ化ｃｔｉｏｎＳａｎｄｔｉｃＤｉｖｅｒｓｉｔｐｉｄｏｆｐｏｒｅｓｉｎＦｉｅｌｄｓＧ州ｅｙｆｒｏｍＵｓｔｉｌａｇｉｎｏｉｄｅａｖｉｒｅｎｓ研巧生：施扬巧指导教师：檀根甲教授巧章就副教授申请学位级别；农学硕±专业名称：植物病理学研巧方向：病害流行与控制所在学院：植物傑护学院答辩委员会主席？二〇—五年六月独创性声明本人声

2、明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取，除了文中特别加标注和致谢的地方外得的研充成果。据我所知，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢〇／琶、学位论文作者签名：旅■的命签字日期與ｒ年（月日：学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农

3、业大学可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位论文全文数据库》，可レッ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。学位论文作者签名：施細指导教师签名：签丰字日期；方＊年ｉＴ月＾日签字日期：年＜月＾Ｅ学工位论文作者毕业后去向：通作单位：电话：信地址：邮编：DissertationforMaster’sDegreeTheRapidDetectionofSporesinFieldsandGeneticDiversityfromU

4、stilaginoideavirensSupervisor:Prof.GenjiaTanMasterCandidate:YangweiShiMajor:PlantPathologyAnhuiAgriculturalUniversityHefei,Anhui,ChinaJune2015摘要稻曲病是由Ustilaginoideavirens（有性态：Villosiclavavirens）引起的水稻穗部真菌性病害，在世界主要水稻种植区均有发生。近年来，随着水稻耕作制度的变化以及品种的更替，稻曲病的危害日益严重，已成为水稻主要病害之一。该病害不仅降低水稻产量，造成巨大经济损失，而

5、且其产生的毒素，严重降低了水稻的品质，且有害人畜健康。目前，稻曲病的防治主要还是化学防治，因此，加强病原菌的监测、流行规律以及遗传多样性的研究，为病害的预报预测奠定基础，对科学指导该病害的化学防治具有十分重要的理论和实际意义。本研究建立了基于Real-timePCR技术的田间稻曲病菌孢子量的快速检测体系；初步监测了田间稻曲病菌孢子的动态，明确了稻曲菌孢子田间释放规律；同时采用ISSR（InterSimpleSequenceRepeat）标记对安徽稻曲病菌进行了遗传多样性分析。主要研究结果如下：1.稻曲病菌孢子快速检测体系的建立采用Real-timePCR技术建立了稻曲病菌

6、孢子量(y)和相应Ct值(x)关系的标准曲线：y=-0.2857x+10.403，(R²=0.9936,P<0.0001)。并对其进行合理性检验以及可靠性检验，结果表明，稻曲病菌不同类型无性孢子的标准曲线间无显著性差异，能够检测出稻曲病菌的厚垣孢子及分生孢子；技术重复的变异系数在0.61%~1.48%之间，生物学重复的变异系数1.8%，该体系重复性好。实时荧光定量PCR检测的孢子量和显微镜镜检的孢子量间存在极显著的正相关(R2=0.8966,P<0.0001）。2.稻曲病菌田间释放规律研究根据建立的Real-timePCR检测体系，监测了2014年7-9月安徽潜山稻作区（

7、东经116.33°，北纬30.4°）的稻曲病菌田间孢子数量动态，结果表明，整个过程有两个释放高峰，分别于8月中旬和9月上旬。结合当地水稻生育期，8月中旬对应中稻孕穗期~扬花期，9月上旬对应中稻乳熟期，并且此时田间可见稻曲球。24小时监测结果表明，晴天多云天气，稻曲病菌孢子一天有两个释放高峰，分别在22:00~24:00和6:00~8:00。阴雨天，孢子的释放与降雨量有极显著的正相关。I3.稻曲病菌遗传多样性分析采用ISSR技术，对采自安徽9个县（市）的49个稻曲病菌菌株进行了遗传多样性分析。从20条ISSR引物中筛选出11条扩