稻曲病菌人工培养性状研究及稻曲球超微结构分析

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1、浙江大学硕士学位论文稻曲病菌人工培养性状研究及稻曲球超微结构分析姓名：陈丽申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：胡东维20060501致谢本论文是在导师胡东维教授曲悉心拍导下宽成曲。导师从论文选题．喂计反写作过程中都给予了精心指导，弄提虫了很多宦贵曲意见与建议。胡老师知识胡博、作风严谨，待人诚患．平易近人，在两年曲的碍霓生生谨中，在科研和生活方面都给予了我无微不至曲指导与关杯。在此，谨向导师致以I幕曝的感豫和崇高的文意／在雨年皓学习中，晰江史学分析溯试中心的徐颢老师，方月鲜老师．洪键老师、摹军英老师、何立平老师和金东

2、宁老师在样品切片反电镜观察等方西伶予了大力支持和帮助。植保系的张曩怿老师在实玲板计和操作方面给予了很多建议和帮助。在此，对他们表示睬深曲谢意，感谢实验室的各位兄弟姐姝，他们在我的科研与生活中都恰予了无微不至的关怀和帮助，在实玲馥计和论文写作中也提出了很多宝贵的意见．他们是陈美军，李凡．拣利刚．鲥崴科，谢礼，李燕宏．孟春梅。感谢所有和我朝夕相处的同学们，感谢同宿舍曲妲姝，感谢生物所所有的老师和同学．感谢他们在生活和学习中恰予我曲关心和帮助／最后．我要感谢我亲爱的父母．家人及朋友。在多年的学习和生活中，他们给予我极太曲鼓励和支

3、持．他们的无私奉献，给了我求是曲信心和勇气／让我再次对所有关心．理解与支持我的老师，家人和朋友表示我衷心的感谢／感谢他们伴随我走过的点点滴滴．我会采远记得和耗福他们的，《8宝弱2006．5．15浙江大学硕士学位论文摘要稻曲病是一种水稻穗部病害，由稻曲病菌Usalaginodeavirens(Cooke)Takahashi在水稻穗部为害产生稻曲球，是一种世界性水稻真菌病害。稻曲病过去仅在中晚稻田零星发生，20世纪80年代以来，随着直立型和密穗型高产水稻品种大力推广及农田肥力的提高，稻曲病的发生日益严重，它不仅影响稻米的产量和

4、品质，而且产生的稻曲病菌毒素，对人和动植物都有毒性，目前已经成为水稻产区的主要病害之一。一般认为厚垣孢子是稻曲病主要的初侵染源，在水稻开花前后从穗部进行侵染；但也有人猜测稻曲病是系统侵染病害。长期以来，由于稻曲病菌的人工接种成功率极其低下，从而制约了稻曲病菌的侵染途径与发育方式的研究。一个行之有效的接种方法一直是稻曲病研究的瓶颈问题。本研究主要对稻曲病菌的分离、纯化及人工培养性状进行了系统的研究，对人工培养的稻曲病菌菌落、稻曲球超微结构进行了超微观察与分析，以揭示自然条件下病原菌侵染和生长的可能途径，为人工接种技术的进一步

5、突破及探索有效防治稻曲病的策略和抗病育种提供科学依据；另外，对稻曲病菌毒素对植物和其它真菌生长的作用进行了初步研究，为探索稻曲病菌毒素的生物学活性及其在致病过程中的作用打下基础。本研究主要有虬下几个方面的结果；一、稻曲病菌的分离、纯化与人工培养性状的研究。通过厚垣孢子悬浮液法在XBZ和PSA培养基上分离纯化稻曲病菌，然后转接到PSA培养基上、PS培养液里、麦粒和稻粒培养基上进行人工培养。在PSA培养基上，26℃黑暗条件下，随着继代培养，发现稻曲病菌菌株UI-[17的人工培养性状发生分化；而稻曲病菌菌株UHl2继代培养后，其

6、培养性状没有发生变化。稻曲病菌菌株UHl7在PSA培养基上，26℃黑暗条件下培养，20天左右可产生大量的厚垣孢子，形成厚垣孢子的方式主要有3种：(1)整个菌落散生厚垣孢子，不形成厚垣孢子堆；(2)菌落上形成一到多个厚垣孢子堆；(3)菌落上形成厚垣孢子球。其中以前2种情况为主，第3种情况较少。在Ps培养液里，26℃黑暗条件下振荡培养稻曲病菌，发现形成厚垣孢子的方式主要有2种：(1)始终不产生厚垣孢5浙江大学硕士学位论文子；(2)先产生黄绿色菌丝球，后在液面形成厚垣孢子菌丝块。在麦粒和稻粒培养基上，26℃黑暗条件下，稻曲病菌在

7、煮熟的带壳谷粒上生长明显比去壳的要慢得多，后期可以产生大量的黄色厚垣孢子堆。二、人工培养的稻曲病菌菌落及稻曲球超微结构观察与分析。稻曲球SEM分析表明，稻曲球表面是一层密集的厚垣孢子，菌丝与稻粒的胚乳层界限分明，大部分稻曲球中部有大块的发育良好的胚乳，并充满密集的淀粉粒，说明稻曲病菌是在开花灌浆后开始侵染的，而且至少后期是腐生的。稻曲球菌组织的TEM观察表明，稻曲球内部菌组织的菌丝致密，排列整齐，脂肪粒比较丰富；稻曲球外部菌组织的菌丝比较疏松，排列无规则，脂肪体已经解体，模糊不清；在稻曲球中间菌组织中，有的菌丝壁局部加厚，

8、菌丝内的脂肪粒十分清晰。可见，稻曲病菌具有非常强的腐生性真菌的特征。三、稻曲病菌毒素对植物与真菌生长的作用。稻曲球浸渍液对水稻胚根胚芽都有明显的抑制作用，抑制率分别为85．8％、45．8％，对胚根的抑制作用明显高于胚芽，这可能是由于胚根直接接触稻曲球浸渍液所导致；Ps培养滤液对稻瘟病菌生长的有一定的抑制