东北地区蜱传内罗毕羊病毒鉴定及全基因组克隆与序列分析

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1、分类号：S855.9单位代码：10193密级：公开学号：2012614硕士学位论文东北地区蜱传内罗毕羊病毒鉴定及全基因组克隆与序列分析Cloningandsequenceanalysisoffull-lengthgenomeofNairobisheepdiseasevirusinticksfromnortheasternChina作者姓名：宫上舒学位类别：农学硕士专业名称：临床兽医学研究方向：中兽医治疗指导教师：赵权所在学院：动物科学技术学院2015年6月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成

2、果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给

3、吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日吉林农业大学硕士学位论文摘要摘要众所周知，蜱是一种寄生在动物体表的吸血寄生虫，是

4、多种人畜共患传染病的重要传播媒介。蜱虫分类上属于动物界节肢动物门、蛛形纲、螨亚纲、寄螨目、蜱总科。全世界已经发现18个属897种，而中国已发现10属，119种。蜱可引起多种重要的自然疫源性疾病和人兽共患病，如Q热、发热伴血小板减少综合征、森林脑炎、出血热等。内罗毕羊病毒(Nairobisheepdiseasevirus)在分类上属于布尼亚病毒科。其主要传播媒介是蜱虫，对公众危害较为广泛，能够引发急性出血性胃肠炎，绵羊和山羊的死亡率高达90%。该病于1910年在肯尼亚的内罗毕附近首次发现，并在1917年确定其病原为内罗毕羊病毒。1994年

5、首次报道发现人感染内罗毕羊病毒发病。内罗毕羊病主要发生在非洲东部的肯尼亚、乌干达、坦桑尼亚、埃塞尔比亚和索马里。目前，内罗毕羊病尚未在中国乃至东亚报道过，因此，对中国东北部内罗毕羊病毒（NSDV）进行鉴定及全基因组序列分析具有重要意义。基于目前东北地区蜱类分布不清、病毒本底尚不明确等因素，本研究在吉林省的集安、敬信、春化、南山、松林，黑龙江省的哈尔滨、呼玛和辽宁省的丹东等10余个县市进行了蜱类的采集。通过形态学鉴定，主要发现四个蜱虫物种，丰富的是长角血蜱属longicornis(84.8%)，其次是矩头蝉属silvarum(7.2%)，

6、矩头蝉属nuttalli(5.5%)和Ixodespersulcatus(2.5%)。通过病毒宏基因组学分析，共获得26411条reads，进一步拼接得到平均长度为108碱基的18997条重叠序列。其中，动物性病毒科数量最多，占病毒序列总数的65%（7505/11547），包括：细小病毒科（Parvoviridae），黄病毒科（Flaviviridae），布尼亚病毒科（Bunyaviridae）等；植物性病毒占19%（2189/11547）；噬菌体序列占16%（1853/11547）。本研究进一步对蜱组织进行裂解，采用RT-PCR手段再

7、次对内罗毕羊病毒（NSDV）进行验证，结果得出吉林集安、敬信及辽宁丹东地区蜱虫均携带内罗毕羊病毒。通过以病毒宏基因组学分析数据及国内外NSDVs病毒序列为参考，本研究成功克隆了内罗毕羊病毒（NSDV）的全基因组。该序列与国外NCBI已收录的全基因组序列进行核苷酸同源性比较，基因片段序列比较显示：在核苷酸水平上相比于其他NSDVs同源性为75.1~89.6%之间，推导出氨基酸同源性在81.3~96.7%之间。相比于其他物种的成员NSDVs(Dugbe,Kupe,HazaraandCrimeanCongohemorrhagicfevervi

8、ruses)，同源性在37.5-68.6%之间。I吉林农业大学硕士学位论文摘要本研究在东亚地区首次证实了蜱传内罗毕羊病毒的存在。另外，基于对以上阳性地区蜱虫形态学鉴定，首次发现了长角血蜱可携带内罗毕羊病毒，