大豆转录因子wri1基因的分离及其功能鉴定

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1、分类号：Q5单位代码：10193密级：公开学号：2012239硕士学位论文大豆转录因子WRI1基因的分离及其功能鉴定IsolationandcharacterizationofGmWRI1transcriptionfactorsfromGlycineMax作者姓名：邓文波学位类别：理学硕士专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：植物分子生物学与基因工程指导教师：李海燕教授所在学院：生命科学学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已

2、经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段

3、保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要大豆(Glycinemax)作为一种极其重要的油料作物，在全球农业经济发展与人类生产生活中占有关键地位。随着人们对于植物油的需求日益增加，提高大豆种子油脂含量变得越来越重要。本研究从大豆吉育72花后35天的种子

4、中克隆得到GmWRI1，并对该基因编码的蛋白的理化性质，结构功能进行了初步分析；对大豆吉育72花后不同时期籽粒中GmWRI1进行定量分析并对不同时期的种子进行油脂含量的分析；利用酵母单杂交的方法研究该转录因子的转录激活活性；并构建重组质粒pBASTA-GmWRI1；通过FloralDip法浸染转化拟南芥获得GmWRI1转基因拟南芥植株，并对不同表达量的转基因拟南芥株系进行定量分析和种子油脂含量的分析，研究结论如下：1.从大豆吉育72花后35天的籽粒中克隆得到GmWRI1全长cDNA序列。GmWRI1的cDNA序列全长为1230bp，编码409个氨基酸；对该基因编码

5、的氨基酸序列进行生物信息学分析发现该基因含有2个AP2/EREBP结构域大约位于氨基酸序列的第56至220位，因此推测大豆GmWRI1基因属于典型的AP2/EREBP转录因子家族，同时通过生物信息学分析该基因定位于细胞核中，通过系统进化树分析，该基因与已知功能的拟南芥AtWRI1同源性高达到48.81%，并通过生物信息学分析了该基因在拟南芥中的互作蛋白。2．通过实时荧光定量PCR对大豆吉育72花后不同时期的种子中的表达特性进行了分析，推测GmWRI1的表达量可能与大豆籽粒中油脂含量有关，同时大豆籽粒生长后期油脂含量的下降可能与大豆种子下一阶段的萌发及脱落酸的积累有

6、关。3．利用重组DNA技术构建酵母表达载体pGBKT7-GmWRI1并转入AH109酵母菌株中，通过观察酵母细胞在缺陷型培养基中的生长情况进行筛选，且在进行β-半乳糖苷酶显色实验时呈现蓝色，结果表明GmWRI1具有转录激活活性，而属于转录激活子。4．利用重组DNA技术构建植物表达载体pBASTA-GmWRI1，并将该质粒转入农杆菌EHA105，利用FloralDip法浸染野生型拟南芥（Columbia型）获得T1代转基因拟南芥植株，同时利用实时定量PCR对获得的多个T1代转基因拟南芥株系进行GmWRI1的表达量分析，选取6个表达量较高的株系，并对其T2代种子的油脂

7、含量进行分析，结果表明结果显示高表达量的转GmWRI1基因拟南芥种子油脂含量与野生型相比差异显著，初步说明GmWRI1对转基因拟南芥中种子油脂含量的提高有促进作用。关键词：大豆；脂肪酸代谢；AP2/EREBP转录因子；GmWRI1；种子油脂含量IAbstractSoybean(Glycinemax)isoneoftheworldwideoilcrops.Itplaysanimportantroleintheagriculturalindustryandpeople'slives.However,becauseofvariousnaturaldisastersand

8、thede