菜用大豆转录因子gmplz及其互作蛋白的研究和菜豆ank家族基因的鉴定

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1、分类号：Ｓ６４３．１单位代码：１０３６４－－密级；７２００：学号口巧签後来必乂葦学位论文菜用大豆转录因子ＧｍＰＬＺ及其互作蛋白的硏究和菜豆ＡＮＫ家族基因的鉴定Ｉｄｅｎｔｉ打ｃａｔｉｏｎｏｆｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎ技ｃｔｏｒＧｍＰＬＺｐａｎｄｎｄａ－ｃａｉｄｔｅｒｏｔｅｉｎｓｉｎＶｅｅｔａｂｌｅｓｏｙｂｅａｎａｎｄＧｅｎｏｍｅｗｉｄｅｐｇＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＡＮＫＧｅｎｅＦａｍｉｌｙｉｎＳｎａｐ

2、Ｂｅａｎ研巧生：张婷指导教师：徐强副教授合作指导教师：徐兆师副研究员申请学位口类级别：农学硕±专业名称：蔬菜学研究方向：蔬菜种质资源与遗传育种所在学院：园艺学院答辩委员会主席：《衫言【二０－五年六月独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作。及取得的研究成果据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方夕ｈ论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过

3、的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：餐病签字日期：如反年巧巧学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部ｎ或机构送父论文的复印件和电子。文件，允许论文被查阅和借阅本人授权安徽农业大学可将学位论《文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到中国学位论＇１、汇编文全文数据库》，可＾采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、。（学位论文，向社会公众

4、提供信息服务保密的学位论文在解密后适用本授权书。）学位论文作者签名：ｋ物指导教师签名：签字日期：ｒ月日签字日期：八抑年少（Ｔ年主月巧学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通信地址：邮编：摘要非生物胁迫严重影响农作物的生长、发育，造成了品质ｗ及产量上不可估量的损失。因此研究作物的抗逆机制Ｗ及挖掘抗逆相关的功能基因对提高作物的抗逆性具有一些蛋白激酶重要的意义，、憐脂结合蛋白及转录因子均能在抵抗植物的逆境方面发挥着非常重要的作用。本文通过对过表达紐化／拟南芥的

5、表型鉴定，发现历？化／转录因子在非干旱和高盐胁迫下发挥重要作用，并通过对其抗逆机制的研究，筛选出与其互作的两个候选蛋白历ｚｆＡｆ蛋白激酶和历？仿公憐脂结合蛋白。通过酵母双杂交技术，验证了候选蛋白与历Ｚ化／转录因子之间的互作关系；另外利用绿色黃光ＧＦＰ融合蛋白表达载体和实时英光定量ＲＴ－ＰＣＲＧｍＰＡＫＧｍＣａ技术，对两个候选蛋白蛋白激酶和ｐ磯脂结合蛋白的分子特征进行了描述，并阐述了化Ｚ转录因子在参与提高植物抗逆性方面的分子机制。通过对菜豆Ａ佩家族基因的生物信息学、分子特征Ｗ及表达模式分

6、析，发现ＡＮＫ蛋白同样在植物抵抗非生物胁迫中扮演着重要的作用，结果如下：－１．历化Ｚ基因的抗逆性分析。通过ＲＴＰＣＲ分析发现历化Ｚ基因在干巧和盐处理条件下上调表达，在干旱化时表达量达到最高：在盐胁迫２仙时表达量达到最高值。一通过对姑？化／过表达拟南芥的表型分析进步证明，该基因在抵抗干旱和高盐胁迫中具有重要的作用。－２．紅Ｚ化Ｚ互作蛋白的筛选。利用酵母双杂义技术ＧｍＰＬＺＧ邮口，构建ｐ诱巧表达载体，对旱、盐胁迫的大豆ｃＤＮＡ文库筛选，通过对筛选结果的测序Ｗ及ＧｅｎＢａｎｋ数据库比对分析

7、，发现其候选蛋白主要参与植物逆境胁迫响应、生长发育和能量代谢等一活动，通过进步研究筛选出两个与其互作的蛋白：ＧｍＰＡＫ蛋白激酶和ＧｍＣａｐ麟脂结合蛋白。３ＧｍＰＬＺ与ＧｍＰＡＫ巧ＧｍＣａ．酵母双杂交验证ｐ的互作。据文献报道，蛋白激酶和磯脂结合蛋Ａ在感知和传导外界胁迫信号过程中扮演重要的作用，本文通过构建ＧｍＰＡＫ－ＧＡＤＴ７和ＧｍＣａ－ＧＡＤＴ７ｐｐｐ表达载体，并将其分别共转化酵母感受态细胞，通过ＧｍＰＬＺＧｍＣａ、Ｇ酵母双杂验证与诱巧蛋白的相互作用，结果表明，在酵母体内与ｐｍＰＡＫＧ

8、ｍＰＬＺ确实存在相互作用关系，结果暗示在植物抵抗非生物胁迫响应中具有重要的意义。４．ＧｍＰＡＫ和ＧｍＣａｐ蛋白的分子特征及表达模式分析。通过构建绿色巧光ＧＦＰ融－ＧｍＰＡＫ－Ｇ昨ＧｍＣａＧ昨合表达载体和ｐ，并将其分别转入拟南芥原生质体细胞，发现ＧｍＰＡＫ和ＧｍＣａ白都具有膜定位特征Ｆ－Ｈｉ－ｐ蛋；通过磯酸化特异抗体鉴定融合蛋白ＴｓＧｍＰＡＫＲｅａｌ－