斜纹夜蛾性信息素合成激活肽(pban)的基因克隆及功能分析

斜纹夜蛾性信息素合成激活肽(pban)的基因克隆及功能分析

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时间:2019-03-14

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1、分类号密级公开编号碛士研究嗲像儉式题目斜纹夜餓性龟素合成激的基因宪隆及功能分析、学院(所、中心)生命科学学院专业名称动物学研究生姓名陆沁学号导师姓名徐进副研究员导师姓名叶辉职称教授年月论文独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研宄成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果,不存在剽窃或抄袭行为。与作者一同工作的同‘志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下:学校有权保留本论文(含电子版),也可以采用影印、缩印或其他复制手段

2、保存论文;学校有权公布论文的全部或部分内容,可以将论文用于查阅或借阅服务;学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖;学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。内部或保密的论文在解密后应遵循此规定)研究生签名:导师签名叶日期:!摘要斜纹夜蛾性信息素合成激活肽的基因克隆及功能分析摘要斜纹夜蛾又名莲纹夜蛾,斜纹夜盗蛾,俗称花虫、黑头虫等,是分布于全世界的农作物主要害虫之一。斜纹夜蛾寄主范围广,食性杂,具暴食性,世代重叠且抗药性强,在适宜生境下很容易爆发成灾,严重时幼虫可将寄主叶片、花全部啃食,造

3、成重大经济损失。利用性信息素诱捕和干扰交配己经在害虫的测报和防控中广泛应用,相应的昆虫合成与释放性信息素的内在机制也成为该领域研究的重点。蛾类昆虫性信息素合成主要由性信息素合成激活肽(及其受体调控。由雌蛾咽下神经节合成并通过血淋巴到达性信息素腺(并与其细胞膜上的受体结合,通过信号转导激活下游性信息素合成途径。由基因编码,但该基因除了编码,还编码滞育激素及另外三种功能不明确的多肽(、。本研究通过简并引物和扩增,首次获得了斜纹夜蛾基因的全长序列该序列全长含有一个编码个氨基酸的其’为、’为。通过神经肽切割位点和和保守序列分析,发现这个含

4、有个氨基酸的前体蛋白在六个位点被切割并得到五个可能的神经肽:,以及、。通过分析还发现该前体蛋白端还含有一个个氨基酸的信号肽。同源性分析表明斜纹夜蛾的蛋白序列与其它鳞翅目昆虫同源性较高(,但与鞘翅目、膜翅目及双翅目(等昆虫的同源性较低(。基于斜纹夜蛾及其它种昆虫的所构建的系统发育树与昆虫分类学完全吻合,云南大学硕士学位论文斜纹夜蛾和其它鳞翅目昆虫以的可信度构成了一个单系。实时荧光定量分析表明,基因在幼虫及蛹期表达量表现出一致性,均是随着龄期的增加表达量逐渐降低,到了老熟幼虫及老熟蛹期,几乎不表达,而在一龄蛹期表达量为一生最高。到了成

5、虫期,的表达量受光周期及龄期影响较大,为白天大于黑夜,但无论白天还是黑夜,表达量都维持在一个比较稳定的水平。内种性信息素,丨和含量的变化也与光周期及龄期有关,总体表现为黑夜大于白天,而刚羽化的雌虫性信息素含量最高。无论白天黑夜,羽化后天内的成虫性信息素含量均维持在一定水平。通过注射人工合成的进行千扰并结合荧光定量分析,结果表明每只雌虫注射〗咫的浓度为问尔,即每只注射显著抑制了斜纹夜蛾基因的表达(相对表达量下调了左右),相应地干扰后内种性信息素的含量也显著下降。进一步地,通过给雌虫注射人工合成的,也显著地提高了雌蛾内种性信息素的含量

6、。交配对雌性斜纹夜蛾性信息素含量及表达量均有影响。雌蛾交配后,表达量降低,但性信息素含量反而升高。本研宄首次克隆了斜纹夜蛾基因的全长序列,并进一步通过表达、、蛋白注射及性信息素合成量分析表明是斜纹夜蛾性信息素合成的关键调控分子。本研究为将来完全阐明斜纹夜蛾性信息素合成与释放的内在机制奠定了基础并为基于性信息素及的害虫防治新途径的探索提供思路和靶基因。关键词:斜纹夜蛾;性信息素合成;;干扰;AbstractIdentificationandFunctionalAnalysisofthePheromoneBiosynthesisAct

7、ivatingNeuropeptide(PBAN)intheCommonCutwormMothSpodopteralitura(Lepidoptera;Noctuidae)AbstractSpodopteralituraisoneofthemostdestructiveinsectpestsofmanyagriculturalcropsandnotoriousfordevelopinginsecticideresistance.Developingenvironmentalfriendlycontrolmethodssuchasn

8、ovelpheromoneandRNAirelatedcontrolstrategiesIsimperativetocontrolthispest.Sexpheromonebasedmasstrappingandmatingdisruptionha

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