斜纹夜蛾亲免素a和亲免素10的分子克隆及表达

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1、分类号一密级公幵编号碛士研究嗲位伶夂题目斜纹夜蛾亲免素和亲免素的分子克隆及表达学院所、中心）生命科学学院专业名称细胞生物学研究生姓名邢文溪学号导师姓名李明职称副教授年月论文独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不存在剽窃或抄袭行为。与作者一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下：学校有权保留本论文含电子版，也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文；学校有权公布论文的全部或部分内容，可以将论文用于查阅或借阅服务

2、；学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖；学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。内部或保密的论文在解密后应遵循此规定）研究生签名条导师签名期：孓、；部分縮写词对照表英文缩写英文全称或拉丁名中文名称细胞系家香烟芽夜蛾草地贪夜蛾斜纹夜蛾抗生素氣节青霉素博莱霄素其他氨基酸抗体抗原减基对脱氧核糖核苷酸空载体小时辣根过氧化物酶异丙基硫代卩比喃半乳糖苷千道尔顿分钟聚丙婦醜胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液PBSTPhosphateBufferedSalineTween磷酸盐吐温缓冲液-20聚合酶链式反应聚偏二氟乙烯膜每分钟转速核糖核苷酸十二烷基磺酸钠硼酸盐

3、缓冲液缓冲液’四甲基乙二胺三羟甲氨基甲烷溴氯』引噪吡喃半乳糖苷本研究基金资助国家自然科学基金项目国家自然科学基金项目国家自然科学基金项目云南省应用基础研究计划重点项目云南省应用基础研宄计划项目农业部”课题教育部留学回国人员科研启动基金第批）云南大学引进人才科研启动基金中文摘要亲免素，是广泛存在于生物体内的保守蛋白家族且都具有肽酰脯氦酸顺反异构酶的活性。亲免素在一系列的生物学过程中发挥重要作用，如辅助蛋白折叠、参与细胞凋亡、信号转导、病毒蛋白组装等过程。近年来相关亲免素的研究主要集中在哺乳动物中，而在斜纹夜蛾中的研究还是首次。本研究所获得的一些结果为进一步探索在昆虫免疫反应中亲免素

4、和亲免素起到的作用提供重要的信息。提取斜纹夜蛾的血淋巴，反转录成，以为模版克隆得到两个基因：和。开放阅读框的大小为编码个，其理论分子量为。开放阅读框的大小为编码个，其理论分子量为。斜纹夜蛾的编码氨基酸的序列分别与大家鼠、非洲爪螺、人、家蚕、粘虫的编码的氨基酸序列相比较，其同源性分别为、、、、和。得到了这些基本信息后，我们构建了的原核表达载体并通过南京巴傲德生物科技有限公司制备得到了的抗体。在此基础上，成功地构建了真核表达载体检测到在四种昆虫细胞、、中的均能表达，其融合蛋白的大小为。免疫荧光显示蛋白在细胞的细胞质中。用真核表达质粒？丁乂出分：转染细胞后，利用技术，沉默细胞中的儿用制

5、备得到的抗体进行检测，我们发现实验组—厕和比对照组表达蛋白量均减弱。同时我们还构建分真核表达载体分其融合蛋白的分子量为。】转染昆虫细胞和提取细胞的总蛋白，结果显示该质粒能在这两种昆虫细胞中有效表达，免疫荧光显示蛋白分布在细胞质当中，靠近在细胞核的位置。关键词：斜纹夜蛾；亲免素亲免素分子克隆；表达AbstractCyctophilins(Cyps)whichpossesspeptidyl-prolylcis-transisomeraseactivity,arewidelydistributedinorganismsasconstitutiveproteins.Cyclophilin

6、salsoplayakeyroleinaseriesofbiologicalprocedures,suchascatalyzingproteinfolding,attendanceinapoptosis,signaltransdictionsandassemblinginHIV-1capsidprotein.Inrecentyears,theresearchaboutCypsmainlyfocusesonitsroleinmammalsbutitisthefirsttimetoresearchinSpodopteralitura.Theseresultsprovidevaluab

7、leinformationforfurtherexploringtherolesofcyctophilinAandcyctophilin10intheinsectimmuneresponse.SpliCypAandSpliCyplOwereclonedfromcDNAofSpodopteralitura.TheORFofSpliCypAwas498bpandthededucedproteincomprised165aminoacidswithacalculatedmolecula