西瓜嗜酸菌趋化性测定及趋化基因chea和chey功能研究

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1、密级：论文编号:中囯农业科学院学位论文西瓜嗜酸菌趋化性测定及趋化基因cAd和c/ieF功能研究ChemotaxisDeterminationandFunctionalAnalvsisof%,cheAandcheYGeneinChemotaxisSvstemofAcidovoraxcitrulli%硕士研宄生：杨姗姗指导教师：赵廷昌研究员申请学位类别.•农学硕士专业.•植物病理学研究方向：分子植物病理学培养单位：植物保护研宄所研宄生院2015年5月独创性声明本人声明所i.夂的纶文是我个人在导师攒导下进行的研究1:作及取得的研究成果〃尽我所辕，除r文中特别加以标注和致谢德地方外，论文中不包

2、含其他人d经发.表或撰写过的研究成栗，也不包含为获得中国农科学_或其■它教#机构®学位或证书ffi使用过的材料〃与我—同工作的同志对本■究所做的任何贡献均B在论文中作了明礴的谨嚷并表示了谢意9,硏究生签名t杨綱[气时_••>0彤年4月>H:关于论文使用授权的声明本人完全了解中H农业科学_有关保留'使用学&论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和僑阅，可以采用影印、缩印或扫描等复鱗手段保存、汇親学位论文《_意中国农&科学S可以用不同方式在不:同媒体上发表、传播学位论文前全娜或部分内容《研究生签名构撕$时间；年g月20导师签名:时_:年I月1日中国农业

3、科学院密级:论文编号:中国农业科学院学位论文西瓜嗜酸菌趋化性测定及趋化基因cheA和cheY功能研究ChemotaxisDeterminationandFunctionalAnalysisofcheAandcheYGeneinChemotaxisSystemofAcidovoraxcitrulli硕士研究生：杨姗姗指导教师：赵廷昌研究员申请学位类别：农学硕士专业：植物病理学研究方向：分子植物病理学培养单位：植物保护研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationChemotaxisDete

4、ctionandFunctionalAnalysisofcheAandcheYGeneinChemotaxisSystemofAcidovoraxcitrulliM.S.Candidate：YangShanshanSupervisor：ProfessorZhaoTingchangMajor：PlantPathologySpecialty:MolecularPlantPathologyMay2015摘要瓜类细菌性果斑病(BacterialFruitBlotch，简称BFB)是世界范围的检疫性细菌病害，主要为害西瓜、甜瓜等葫芦科作物，造成重大的经济损失。西瓜嗜酸菌(Acidovoraxci

5、trulli,Schaadetal,2008)是其病原菌，有研究表明病原细菌在寄主表面的定殖能力与其致病能力关系密切，而病原细菌的趋化能力是决定定殖能力的关键因素之一。本研究主要围绕西瓜嗜酸菌的趋化性测定及其趋化基因的功能展开，主要结果如下：1、初步测定西瓜嗜酸菌Ac-5菌株的趋化性利用毛细管法测定碳源、氨基酸、有机酸等对西瓜嗜酸菌趋化性的影响。结果发现：麦芽糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖和半乳糖显著促进西瓜嗜酸菌的趋化性；L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-脯氨酸、L-谷氨酸和L-谷氨酰胺显著促进西瓜嗜酸菌的趋化性，而L-蛋氨酸显著抑制其趋化性；柠檬酸和苹果酸显著促进西瓜嗜

6、酸菌的趋化性；氯化钠、硫酸镁等对西瓜嗜酸菌的趋化性无显著影响。2、Ac-5菌株趋化基因cheA和cheY的生物信息学分析登录NCBI数据库西瓜嗜酸菌全基因序列查找cheA和cheY基因的相关信息。cheA和cheY基因分别编码CheA和CheY蛋白。CheA和CheY蛋白均存在多个疏水性氨基酸区域；CheA蛋白是一种跨膜蛋白，在600-700氨基酸处(即CheW结合区域)有跨膜结构，CheY蛋白不存在跨膜结构，是一种膜内蛋白，用于接收CheA蛋白的信号；西瓜嗜酸菌CheA蛋白与青枯菌的CheA蛋白亲缘关系最近，和荧光假单胞菌的亲缘关系最远。3、Ac-5菌株趋化基因cheA和cheY3的

7、功能研究构建ΔcheA和ΔcheY3基因缺失突变株以及CcheA互补菌株，并进行表型分析。结果发现：ΔcheA和ΔcheY3基因缺失突变株与野生型菌Ac-5相比，趋化及运动能力下降；在种子表面的定殖能力下降；病株病情指数先下降后恢复野生型菌株Ac-5水平；生物膜形成能力增强；引起非寄主烟草的过敏性反应。4、cheA基因缺失对其他基因表达量的影响利用荧光定量PCR分析cheA基因缺失对其他基因表达量的影响。结果显示cheA基因在突变株中不表达，T