杜梨子叶再生及遗传转化体系的建立

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1、＇４‘＇叢４－恥＇．Ｓ６６．２分类号：１学校代码＾：１０７５８；、密级：公开学号：１巧３０２０４４８，朱、ｉ＊＇＞＞￡＼＇＇言ｙ－ｆｖ农业推广硕壬专业学位论文／ｒ杜梨子叶再生及遗传转化体系的建立ＥｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄＧｅｎｅｔｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ－■ＶＳｙｓｔ；ｅｍｏｆＴＭＳ皮姗ｆ／ｔｆｃｏ／ｚｆｌＣｏｔｌｅｄｏｎｓ？■＞；巧／ｙｒ．豕夕ｆｙｌ＂Ｌ＾二研究生姓養林静导师姓

2、拿及职称李疆教授鳥苗．奔５合作导卿姓葦及职称李芳艳推广研究员学位口类级别农业推广硕击，．■专业毒称园艺ｒ．．：；Ｙｙｆｆ研究方向国艺作物种质资源考齡艮‘！＾州Ｉ．所在学院林学与国艺学為Ｊ＇、古．１＼＾．’新疆乌鲁木齐／：ｒ：；篮心，；Ｊ独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的硏究Ｘ作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地为外，论文中不包含：化他人ＥＶ经发巧或撰写过的研究成果也不包含为获得新顯农业大，

3、一学或其他教育单位的学位或证书而使巧过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作ｒ明确的说明并发示了谢Ｗ意。Ｒ研究生签名：时间：年巧关于学位论文使用授权的说明驢本人完全了解新疆农业大学巧关保留、使用学位论义的规定，目Ｉ］：新农业大学有化保留井向国家巧关部口或机构送交论义的复印件和屯子义巧，可采川影印、缩印或巧描等資制平段保巧、汇编学位论文，允巧论入文被兹阅和借阅。本人授权新聽农业大学将学位论义的令部或部分内容编有关数据昨进行检索，公化（包巧刊登）论义的令部或部分内容。（保密的

4、学位论义在八解密后应遇冲此协议）时间：ｃ）。化化＜＾少的［Ｉ研究化豁名：子‘导师媒时间：年Ｗ本文是国家高技术研究发展计划（“863”计划）课题“梨分子育种与品种”创新项目的部分研究成果（项目编号：2011AA10020604）课题主持人：李疆教授（新疆农业大学）I杜梨子叶再生及遗传转化体系的建立摘要新疆库尔勒香梨作为特色果品，香甜多汁、爽脆可口，但其可食用部分较少，为改良梨品质大小的性状，通过对小果型杜梨的转基因研究，进行其功能验证。本研究以杜梨子叶作为试验材料。通过对杜梨(pyrusbetulaefoliaBun

5、ge)子叶再生不定芽及根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导遗传转化若干因素的研究，建立起杜梨子叶的再生体系，并对其遗传转化体系进行了探索性研究，尝试将PbFWL基因导入杜梨植株体内。主要研究结果如下：1.以杜梨子叶作为外植体，筛选出诱导杜梨子叶不定芽的最佳培养基为NN69。在对杜梨子叶诱导再生不定芽中，选用的激素组合为6-BA和IBA。当6-BA浓度为3～6mg/L，IBA浓度在0～0.2mg/L时，均可诱导出愈伤组织及组培苗，不加生长素IBA也可以诱导出不定芽，且6-BA/IBA的比值越大，生芽率越

6、高，比值越小，愈伤组织越大，越不利于杜梨不定芽的生长。因此筛选出诱导杜梨子叶不定芽的6-BA最佳浓度是5mg/L，IBA最佳浓度是0.05mg/L。当6-BA浓度是5mg/L或6mg/L时，有玻璃化苗的产生，可将蔗糖（sucrose）浓度由30g/L增加至35g/L，并放置于光照条件较好的地方培养，玻璃化苗恢复率为100%。由此诱导不定芽培养基为NN69+6-BA5mg/L+IBA0.05mg/L+sucrose35g/L，暗培养21d的条件下诱导杜梨子叶再生不定芽率为100％。2.诱导出不定芽后，在原培养基上继代培养，再生不定芽

7、数可达2.3。选用继代培养基MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L+sucrose30g/L，继代20d左右组培苗长势健壮，诱导不定芽数可达到4.84。3.杜梨的生根培养基及激素浓度的筛选中1/4MS不适宜杜梨不定芽生根。筛选出最佳生根培养基为1/2MS，IBA最佳生根浓度为1.0mg/L，蔗糖浓度为30g/L。诱导杜梨不定芽生根的最佳培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+sucrose30g/L，诱导出的根长及根数最佳，无暗培养，诱导生根率为80％。4.以杜梨子叶为受体材料，利用根癌农杆菌介导技术将梨果实品质、大

8、小的基因PbFWL导入梨子叶内。筛选出菌液浓度OD600值为0.5时，侵染时间为5min，共培养时间2d，在转化前进行了杜梨子叶对卡那霉素抗性的筛选试验，筛选出卡那霉素浓度20mg/L。筛选抑菌的抗生素Cef浓度300mg/L。但外植体只生长至愈伤