马铃薯再生体系的建立及遗传转化的研究

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1、东北农业大学硕士学位论文马铃薯再生体系的建立及遗传转化的研究姓名：李晶申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：陈伊里;卢翠华2003.6.1摘要本研究对马铃薯再生培养基、基因型、外植体类型进行了系统筛选，并对影响再生率和农杆菌介导遗传转化主要因素进行了优化，建立了一个适于农杆菌介导遗传转化的高效受体系统，同时对几丁质酶(chi)基因进行了遗传转化。实验采用茎段和薯块两种外植体类型，茎段最佳愈伤培养基为MS+0．Img／12，4-D+1mg／IBA，最佳分化培养基为MS+lmg／IZT+1ing／1GA3，较适宜侵染时间10min：薯块最佳愈伤及分化培养基均为MS+2mg／IZT+I

2、mg／lIAA，较适宜侵染时间5min。杀菌剂选用进口头孢噻肟钠，在浓度为200mIg仃时，既可完全抑制菌的生长，又对外植体再生无影响。选择剂卡那霉素(Kan)在愈伤形成和生根阶段最适浓度分别为50mg／l和75mg／I。实验共接种转化1395个茎段和363个薯块外植体，获得4株转幽f基因东农303抗性再生株，经PCR检测及PCR·Southern杂交检测，有3株呈阳性，转化率为3．2％。关键词马铃薯；簿拿≥遗传转化；chi基因；V鞍二f东北农业大学农学硕士学位论文．AbstractThesystematicscreeningsofmediumsforregeneratingplants

3、，genotypesandexplantformswereconductedandmainfactorsaffectingregeneratingratesandgenetictransformationwereoptimizedaSwell．Ahighefficientreceptorsystemadaptedforgenetictransformationbyagrobacteriumhadbeenestablished．Genetietransformationofchitinase(chOgenewascarriedoutinthestudy．Twotypesofexplants

4、，tuberpiecesandstemcuRings，wereusedinthestudy．Fortuberpieces．optimummediumforcallusculturewasMS+0．1mg／l2,4-D+Iml／IBA；thebestmediumfordifferentiationWasMS+Img／lZT+Img／lGA3；optimuminfectiondurationwas10min．Forstemcuttings．thebestmediumforbothcalluscultureanddifferentiationwasMS+2mg／lZT+Img／lIAA，and

5、optimuminfectiondurationWas5min．Cefotaximesodiumwasusedasbactericide，whichcanrestrainbacteriumjnfeetionwithoutanynegativeinfluenceonregenerationofexplantswhentheconcentrationwas200ml／1．ThebestconcentrationofkanamycineusedasselectiveagentWaS50mg／lforcallusformationand75m∥lforradicationrespectively

6、．Intheexperiment，1395stemcuttingsand363tuberpieceswereinfectedbychigene，and4transformedplantsfromvarietyNEA303wereobtained．BytestsofPCRandPCR-Southernhybridization，3transformedplantswerepositivereaction，andthetransformationratewas3．2％．KeyWords：potato；regeneration；genetictransformation；chigeneVI1前

7、言1．1研究的目的和意义晚疫病是马铃薯生产上危害最大的真菌性病害，马铃薯生产区域均有发生和流行，是影响马铃薯产量的第一位病害。晚疫病抗病育种进展一直很缓慢，主要是由于马铃薯自身的四倍体特性和高度异质性，常导致自交不孕和雄性不育，品种遗传基础处于杂合状态，尤其是A2交配型的出现使晚疫病生理小种更加复杂。目前使用的农业防治措施主要是利用药剂(杀菌剂)，但反复大量使用药剂，既不经济又对环境产生危害，同时又使晚疫病生理小种产生抗药性。近年来