沼液中活性成分的分析及萜类转化机制探究

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1、学校代码：10264研究生学号：M120208465上海海洋大学硕士学位论文沼液中活性成分的分析及萜类题目：转化机制探究AnalysisofBiogasSlurryActiveComponents英文题目：andTerpenoidTransformMechanisms专业：食品科学与工程研究方向：海洋生物制药姓名：吴慧斌指导教师：许剑锋二O一五六月六日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文

2、不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者

3、签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注周培根东海水产研究所教授主席焦炳华第二军医大教授委员李学英东海水产研究所研究员委员陈舜胜上海海洋大学教授委员汪之和上海海洋大学教授委员倪婷上海海洋大学实验员秘书东海水产研究所答辩地点答辩日期2015.6.73号楼301室沼液中活性成分的分析及萜类转化机制探究摘要沼液是人畜粪便和各种农作物秸秆等有机物经沼气池厌氧发酵后的液体残留物。随着我国沼气工程的不断推广，作为沼气厌氧发酵的主要副产物之一的沼液的量也越来越多，其中含有多种农作物

4、所需的营养元素。研究表明，沼液是一种速效水肥，主要被用作饲料添加剂、叶面肥、浸泡种子等。目前针对于沼液的研究仅限于它的理化性质、矿物质含量、重金属含量以及氨基酸和B族维生素含量的测定。沼气产生的过程同时是一个微生物发酵的生化过程，能够将饲养场废弃物转化分解生成一些次级代谢产物，例如脱落酸，赤霉素，雌二醇。而且微生物在这种极端的环境条件下经常会转化出一些结构新颖的化合物，存储在沼液中，使得沼液呈现出一些特殊性质。例如，鸡粪沼液能够抑制微生物生长，减少农作物病虫害，增加作物产量。已经有研究表明，在农作物上喷施沼液具有一定的抑菌作用，沼液

5、对近30种农作物病害具有防治作用，对19种虫害有明显的防治效果，现已在农业生产中广泛应用，但其促进作物生长和防止病虫害作用机理尚不明确。然而至今并没有文献报道鸡粪沼液的化学组成。为了分析沼液化学组分、抑菌机理和微生物转化机制。本次研究选取上海市浦东新区六灶镇同济大学定点实验点——文彬养鸡场沼气池沼液，通过萃取、硅胶柱分离、诸多色谱方法从鸡粪沼液中分离鉴定得到三个化合物，并评价了三种化合物的细胞毒性，并对大豆甾醇B的微生物转化进行了探究，从而探究沼液中五环三萜的来源。本次研究分离到三个化合物，通过质谱和核磁共振等方法以及文献对比鉴定其

6、结构分别是：叶黄素、6-羟基-3,4-二氢喹啉-2-酮、大豆甾醇B。通过MTT法评价分离到的三个化合物的细胞毒性。所选用细胞为HepG2肿瘤细胞、DU145肿瘤细胞、HCT116肿瘤细胞、NCI-H460肿瘤细胞、K562白血病细胞。化合物2对NCI-H460，DU145有较好的抑制作用。其IC50值分别是152.95μg/mL和133.65μg/mL。其余化合物均没有显示出抑制肿瘤细胞的活性。分离得到的三个化合物其中一个为大豆甾醇B，是一类五环三萜类化合物，本课题组已经分离到的四个新的五环三萜结构与大豆甾醇B结构及其相似，而且鸡饲

7、料中含有大豆甾醇B，所以推测这些化合物由大豆甾醇B转化而来，有可能在鸡肠道内被转化I或者在沼液中被转化。为探究其转化机理，选取16株菌，其中包括五株细菌和十一株霉菌，对其进行发酵转化，最终筛选出一株可转化大豆甾醇B的菌-产黄青霉CMCC3.3890。通过LC-MS/MS检测发酵液的乙酸乙酯萃取物，得到质荷比为407,425,427的三个主要的分子离子峰。通过数据库匹配，对应化合物可能是3ß-羟基-24-降齐墩果烷-12-二烯-22-酮，雌二醇-4，24二烯-3，6-二酮，(9xi,10xi,13xi,17xi,22E,24xi)-雌

8、二醇-4,6,8(14),22-四烯-3-酮，(22E,24xi)-雌二醇-4,6,8,22-四烯-3-酮，(4α,5α)-4-甲基麦角醇-8,24-二烯-3,11-二酮，(17xi,22E,24xi)-3-羟基雌二醇-5,8,22-