烟草t-dna激活标签发育改变突变体基因克隆与功能分析

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1、密级：论文编号:中囯农亚科学院学位论文烟草T-DNA激活标签发育改变突变体基因克隆与功能分析CloningandFunctionalAnalysisofaT-DNAActivation-TaggedAlteredDevelopmentProgramMutantGeneinNicotianatabacum硕士研宄生：张艳艳指导教师：刘贯山研究员申请学位类别：农学硕士专业：作物遗传育种研宄方向：分子育种培养单位：中国农业科学院烟草研究所中国农业科学院研究生院2015年5月密级:论文编号:中国农业科学院学位论文烟草T-DNA

2、激活标签发育改变突变体基因克隆与功能分析CloningandFunctionalAnalysisofaT-DNAActivation-TaggedAlteredDevelopmentProgramMutantGeneinNicotianatabacum硕士研究生：张艳艳指导教师：刘贯山研究员申请学位类别：农学硕士专业：作物遗传育种研究方向：分子育种培养单位：中国农业科学院烟草研究所中国农业科学院研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDisse

3、rtationCloningandFunctionalAnalysisofaT-DNAActivation-TaggedAlteredDevelopmentProgramMutantGeneinNicotianatabacumM.S.Candidate：ZhangYanyanSupervisor：Prof.LiuGuanshanMajor：CropGeneticsandBreedingSpecialty：MolecularBreedingMay2015本人声明所呈交的论文足我个人在导师指导丨、进行的研究工作及取得的仙究

4、成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，岜不包含为获得中&丨农业科学院或其它教存机构的学位或证书而使丨lj过的材料。b我-同[:作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究m極NN:'!■5关于论文使用授权的声明本人完全了解中M农、Ik科学院打关保留、使川学位论文的规定，即：中W农业科学院有权保留送夂论文的k印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采Ifj影印、缩印或扫描等复制:f-段保#、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方

5、式在小N媒体h发表、传描学位论文的全部或部分内容。研究生签名：舐艳指时间：年A月枚R导师签名:时间：知/J：年I月<円中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目、阁

6、>州教汴4整爱音故变矣变尿卷旬皂淹占劝能砂矸论文作者张艳艳专业作物遗传育种研宄方向分子育种指导教师刘贯山培养单位（研宄所）烟草研宄所姓名职称硕（博）单位专业签名评阅人硕导口博导口硕导口

7、答辩主席博导口硕导口刘家尧教授青岛农业大学分子生物学^1'博导硕导□中国科学院青岛生物周功克研究员分子生物学博导#能源与过程研究所硕导口隋正红教授中国海洋大

8、学分子生物学博导&答硕导口郭立忠教授青岛农业大学微生物学博导口辩硕导口中国科学院青岛生物付春祥研究员分子生物学博导能源与过程研究所委硕导口中国水产科学研究院张庆利研宄员海洋生物学口博导3黄海水产研究所贝硕导[山东省农业科学院花单世华研究员遗传育种博导4生研宄所硕导口博导口会议记录（秘书:论文答辩时间地点_2〇/5■年5月％蝴#砰拜二4义室~摘要本研究在T-DNA激活标签插入红花大金元的突变群体中观察到一个突变株系，该突变株系较红花大金元表型有明显改变，主要表现为矮化、叶间距短。通过对突变株系侧翼序列的扩增及后续的共分离

9、试验确定引起突变的激活标签的位置，对插入位置两侧基因表达量进行分析筛选激活基因，后续的转基因试验则进一步验证了基因的功能。通过以上研究，本文主要得到以下结果：(1)根据该株系在T2、T3代的分离情况，初步可以判断该突变表型为单基因控制的显性突变。采用FPNI技术对突变株系进行侧翼序列扩增，所得侧翼序列在烟草基因组数据库中进行序列比对。序列比对结果显示，突变体有两个插入位点，分别插入到1号染色体和10号染色体中。共分离试验结果显示，10号染色体的插入是引起突变表型的插入。株系中阳性无突变表型植株的侧翼序列扩增结果也证实了

10、这一结论。(2)利用烟草基因组数据库，结合茄科植物数据库中信息，寻找插入位置上下游120kb内的基因。结果显示，10号染色体在插入位点附近有5个基因，最近基因Ntab0245760距离插入位点71kb。该基因属于多药有毒化合物排出家族。选取插入位点附近的5个基因进行相对定量PCR。相对定量的结果显示，5个基因中，Ntab02457