红芸豆植物凝集素（rkbl）终止小鼠中期妊娠作用机理的初步研究

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1、分类号密级UDC编号硕士研究生学位论文论文题目：红芸豆植物凝集素（RKBL）终止小鼠中期妊娠作用机理的初步研究APreliminaryStudyonMechanismofRKBLTerminatingtheMid-termPregnancyinMice学院生命科学学院专业名称发育生物学研究生姓名杨成焕学号12071008003导师姓名王敏康职称教授2015年6月12日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下行的硏究工作及取得的硏究成果。尽我所知，除女中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已

2、经发．表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集。体，均已在文中明确方式标明本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。＾族学位论文作者签名；捉ｆＸ年＾丹＾日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关被留、使用学位论文的规定：，即学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论。文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅本人授权云南师范大学可臥将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可从采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。＾学位论文作者签名：

3、７请指导教师签名娘＾；■年Ｊ月日皆年月為知６中文摘要摘要凝集素是一种无免疫原性的蛋白质，广泛存在于动物、植物和微生物中。植物凝集素不仅具有凝集细胞的作用，并且参与体内一些重要的生理过程，已经广泛应用于农业、畜牧业及医药等行业。凝集素受体是存在于细胞膜表面的糖蛋白或糖脂，可以与相应的凝集素发生特异性的结合。许多实验证据表明，凝集素受体在受精、妊娠等生殖过程中有具有重要的影响和作用。芸豆植物凝集素（kidneybeanlectin，KBL）是从芸豆中提取的糖蛋白，其特异性结合糖为β-半乳糖、α-甘露糖和α-乙酰葡萄糖胺。本

4、实验室以往的研究发现KBL具有抑制受精、终止不同时期妊娠的作用，但对其机理还缺乏较为系统和全面的研究。因此，本研究从整体、组织、细胞及分子水平进行了一些相关的研究。目的：探究KBL在终止小鼠妊娠过程中对相关性激素、胎盘和子宫的影响，为研究KBL终止妊娠的机制提供实验依据。同时，考虑将来的临床应用，也研究了不同性别的小鼠对KBL的耐受性。以期为生殖医学和研究新型避孕药提供基础实验依据。方法：1、通过非手术法子宫给药的方式观察红芸豆植物凝集素（Redkidneybeanlectin，RKBL）在终止昆明小鼠妊娠过程中对生殖内分泌激素的

5、影响。2、对RKBL处理的小鼠胎盘进行形态学观察、台盼蓝染色、甲基绿-派诺宁染色、DNA电泳、TUNEL检测，8-异前列腺素F2α的测定，了解RKBL在终止小鼠妊娠过程中对胎盘的影响。3、通过测定并比较培养乳酸菌和盘基网柄菌前后的培养基中RKBL的凝集活性和分子的完整性。4、选用经口（限量试验）和经腹腔（LD50测定）两种方式对RKBL进行了急性毒性试验。结果：1、在性激素变化方面，应用RKBL终止妊娠过程中孕鼠血清中E2、FSH、LH和T无明显变化；P和PRL在注射RKBL后呈先升高后降低的趋势，并且在对照组与实验组间差异显著；

6、胎盘匀浆的8-iso-PGF2α水平无明显变化，而子宫匀浆8-iso-PGF2α水平在给药后明显下降。2、在组织水平，RKBL可导致妊娠小鼠胎盘出现充血和坏死的现象，胎盘边缘有明显台盼蓝染色；3、在细胞和分子水平，甲基绿-派诺宁染色与TUNEL检测、DNA电泳条带显示胎盘出现坏死和凋亡现象；4、在作用方式上，RKBL在促进乳酸菌和盘基网柄菌增殖的同时其凝集活性和含量不会降低。5、不同性别的急性毒性试验结果表明，腹腔单次注射RKBL，雌鼠LD50为743.242mg/kg，其95%可信区间为658.053~848.953mg/kg;

7、雄鼠LD50为535.452mg/kg，其95%可信区间为I中文摘要480.961~598.818mg/kg；限量试验结果大于5000mg/kg。结论：1、使用RKBL终止小鼠中期妊娠时不改变孕鼠体内的E2、FSH、LH、T和8-异前列腺素F2α水平，而对P和PRL有较大影响，提示RKBL终止小鼠妊娠不是通过影响整体神经内分泌轴（下丘脑-垂体-靶腺轴）的下丘脑及垂体水平而实现。2、注射RKBL后引起小鼠胎盘坏死、凋亡或副凋亡，提示RKBL终止妊娠主要是通过引起胎盘坏死、凋亡或副凋亡途径实现的。3、RKBL能够在细胞外促进乳酸菌和盘

8、基网柄菌增殖，且这种增殖作用主要是通过细胞外信号传递方式，RKBL本身不会作为能源物质被利用或降解。4、RKBL的属于低毒，对不同性别的昆明小鼠具有量效作用差异。单次腹腔注射RKBL，雌鼠的耐受性高于雄鼠。关键词：红芸豆植物凝集素；小鼠；终止妊娠；