细胞缝隙连接通讯在镉致大鼠肝细胞损伤中的作用及调控机制

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1、■，分巧号巧号ＩＨ：ＭＳ４４＊＾４敏＇＇＇＼Ｎ＇Ｖ（ｉ／ＩＯｌＵＮＶＩＳＩＩＪＩＩＲＴｉ博壬学住冷文细胞缝隙连接通讯在福致大鼠肝细胞损伤中的作用及调控机制邹辉２２５００９指导教师姓名：刘宗平教授，扬州大学，江苏扬州，申请学位级别；博去学科专业名称：临床善医学＿论文提交日期：２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月１学位授予单位；扬州大学学位授予日期：２０５年６月答辩委员会主席；＿＿＿＾细胞缝隙连接通巧在福致大贏肝细胞损伤中的作用及调控机制Ｔｈｅｒｏｌｅ

2、ａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｇｐｊｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｉｎｄａｍａｇｅｏｆｒａｔｌｉｖｅｒｉｎｄｕｃｅｄｂｃａｄｍｉｕｍｙ研究生：邹辉导师：刘宗平教授｜；备学科专业｜床兽医学资助项目：国家自然科学基金（３１３７２４９５，３１３０２０５８）扬州大学２０１５年６月邹辉＝细胞缝隙连接通讯化福致大鼠肝细胞损伤中的作用及调控机制１＿细胞缝隙连接通讯在福致大鼠肝细胞损伤中的作用及调控机制中文摘要细胞缝隙连接通讯（Ｇａ

3、ｐｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，Ｇ．ＴＩＣ）是哺乳动物细ｊ一胞间普遍存在的种通讯方式，在细胞增殖、分化、调ｔ、死亡等生理过程中具有重要作一用种重要的工业和环境污染物，危害人和动物的健康，。福是肝脏是锡的重要祀器官之一。，福不仅引起肝细胞稠亡，还能抑制肝细胞ＧＪＩＣ，影响细胞缝隙连接蛋白的表达和分布但ＧＪＩＣ在矯暴露肝脏损伤过程中的作用机制尚不明确。本研究在体外用２．５、１０ｍｉｏｌ／Ｌｉ福和５０胖ｎｏｌ／Ｌ红景天巧（Ｓａｌｉｄｒｏｓｉｄｅ，Ｓａｌ）单独或联合作用ＢＲＬ

4、３Ａ细胞６、１２ｈ；并选择一８０－Ｂ１０化雌性ＳＤ大鼠，５０ｍｇ／Ｌ福自由饮水，３５ｍｇ／ｋｇ．Ｗ．Ｓａｌ每天灌胃次，单独或联合处理１２周，建立动物模型。通过细胞生物学和分子生物学方法，探讨儒致大鼠肝脏损伤过程中ＧＪＩＣ的变化Ｗ及其在巧离子通路、ＭＡＰＫ通路Ｗ及自唆调控福致肝细胞毒性损伤中的作用机制，并阐明Ｓａｌ在上述过程中的保护作用。为揭示領致肝脏毒性损伤的分子机制提供依据。１、铜致大鼠肝细胞损伤及Ｓａｌ的保护作用为了研究福对大鼠肝细胞毒性的影响，本试验通过体内ａｌ、体外试验检测偏及Ｓ对ＳＤ大鼠细胞活力、

5、细胞形态、细胞指数、肝脏脏器指数、肝脏组织病理学变化和肝细胞超微结构的变化。体外试验结果表明，不同剂量福（２．５、５、１０、２０ｔｉｍｏｌ／Ｌ）暴露致８民１＾３八细胞皱缩、死细胞増多、细胞核收缩、变形、破裂，、细胞间隙增大核染色质浓缩成点状－分布、（ＣＩ），并且呈明显的时间剂量效应。不同浓度（２５、、细胞存活率下降细胞指数下降州、１００＾ｉｍｏｌ／Ｌ）８３１对０无显著影响，提示８３１在所选浓度范围内基本无细胞毒性。染５０一ｍ福组与ｎｍｏｌ／Ｌ８３１联合处理明显减轻嬌导致的ＣＩ下降速度。这结果表明，５０ｌｏｌ

6、／ＬＳａｌ＾ＬＣ１ｎｏｌ。对２．５阵ｌｏｌ／ｄ和０叫／ＬＣｄ导致的细胞毒性有保护作用体内试验结果表明，染铜组（５０ｍ／ｋＢ．ｇｇ．Ｗ）大鼠肝脏脂肪变性，肝细胞排列奈乱，中央静脉游血。Ｃｄ与Ｓａｌ联合处理组大鼠肝脏脂肪变性相对于染福组有明显好转。透射电镜观察肝细胞超微结构发现，染福组的肝细胞核染色质明显收缩，，线粒体崎模糊细胞核固缩、浓染；线粒体肿胀、断裂甚至崩解，部分形成空泡。Ｓａｌ可明显减轻Ｃｄ对大鼠肝细胞线粒体和细胞核的损伤。ｎ扬州大学博止学位论文２、領对大鼠ＧＪＩＣ的影响为了研究領对ＧＪＩＣ的影

7、响，通过染料划痕示踪法检测ＧＪＩＣ，免疫印迹法检测连接蛋白３３２ＰＣＲ检４３，ＲＴ，Ｃｘ４、Ｃｘ，实时定量测Ｃｘ、Ｃｘ３２相关基因表达ＣＡ检测细胞指数免疫巧光观察Ｃｘ４３在ＢＲＬ３Ａ细胞上的分布，免疫电镜观察连接蛋白在肝细胞上的分布，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ共培养体系观察領暴露受损肝细胞通过ＧＪＩＣ对正常肝细胞的影响。结果表明，Ｃｄ能下调ＢＲＬ３Ａ细胞中Ｃｘ４３、Ｃｘ３２的表达水平队及Ｃｘ４３憐酸化水平７＜化０５或？＜化０１，动物试（／；）验也证实Ｃｄ可下调Ｃｘ３２的表达。ＧＪＩＣ抑制剂ＧＡ与Ｃｄ联合处理加剧了Ｃｄ致ＣＩ的下

8、降，提示ＧＡＣｄＳａｍ及ＧＪＩＣ加剧了的细胞毒性。箱暴露细胞可导致与之相邻的正常细胞损伤，添加抑制剂ＧＡ可明显减轻領暴露受损细胞对正常细胞的毒性损伤作用。Ｓａｌ可抑制Ｃｄ对知１Ｃ的