羊种布鲁氏菌对巨噬细胞mhc ii表达和递呈的影响

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1、分类号：密级：学号：2012108030单位代码：10759石河子大学硕士学位论文羊种布鲁氏菌对巨噬细胞MHCII表达和递呈的影响学位申请人袁莎指导教师陈创夫教授申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称预防兽医学研究方向畜禽病原分子生物学所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2015年6月TheInfluenceofB.abortusonMacrophagesMHCIIExpressionandPresentationADissertationSubmittedtoShiheziµniversityInPartialFulfillmentoftheR

2、equirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByYuanSha(PreventiveVeterinary)DissertationSupervisor:Prof.ChenChuangfuJune，2015Shihezi,Xinjiang,China石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文

3、中作了明确的说明并表示谢意。使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。课题来源国家自然科学基金项目项目名称：绵羊主要组织复合体I类分子免疫遗传学研究项目编号：31172303国家973项目项目名称：布鲁氏菌侵染与胞内寄生的分子机制研究项目编号：2010CB530203摘要布鲁氏菌病(Bru

4、cellosis，简称布病)是由布鲁氏菌属(Brucella)的布鲁氏菌引起的一种古老的人畜共患传染病病，该病在世界范围内广泛流行，严重危害公共卫生安全，并造成畜牧业经济巨大损失。巨噬细胞是布鲁氏菌感染宿主后的首要靶细胞，巨噬细胞不仅是宿主体内重要的免疫细胞，也是一种重要的抗原递呈细胞，在清除病原菌、分泌多种细胞因子和对抗原的识别、活化以及免疫调节中扮演着重要的角色，国内外己经有一些研究表明布鲁氏菌感染宿主后具有明显的免疫抑制作用，能够抑制MHCII分子的功能，然而，其相关原因尚不明确。本文主要研究布鲁氏菌侵染巨噬细胞后引起的非典型自噬对MHCII

5、类分子的影响以及布鲁氏菌诱导非典型自噬的可能因素，为研究布鲁氏菌免疫抑制提供新的思路和方法。1.布鲁氏菌16M诱导的非典型自噬对巨噬细胞MHCII表达和递呈的影响。以0.25ng/mLIFN-γ处理的小鼠巨噬细胞、布鲁氏菌16M侵染0.25ng/mLIFN-γ处理的小鼠巨噬细胞为实验组，以未处理细胞为对照组，分别作用0h、4h、12h、24h，实时荧光定量PCR检测胞内MHCII类分子的转录水平；以布鲁氏菌16M侵染0.25ng/mLIFN-γ处理过的小鼠巨噬细胞，16M侵染0.25ng/mLIFN-γ处理的稳定表达Atg5、Atg7的GFP-LC

6、3小鼠巨噬细胞为实验组，转染空质粒的GFP-LC3小鼠巨噬细胞为对照组，实时荧光定量PCR检测细胞内MHCII转录水平，激光共聚焦检测细胞内自噬小体和溶酶体的融合率，流式细胞技术检测细胞表面MHCII类分子平均荧光强度和OMP31平均荧光强度。结果，与0.25ng/mLIFN-γ处理组相比，布鲁氏菌16M侵染0.25ng/mLIFN-γ处理的GFP-LC3小鼠巨噬细胞，MHCII分子mRNA水平极显著下降（p<0.01）；布鲁氏菌侵染稳定表达Atg5和Atg7的GFP-LC3小鼠巨噬细胞后，细胞内MHCII类分子mRNA水平差异不显著(p>0.05

7、)，但自噬小体和溶酶体的融合率升高，细胞表面MHCII类分子表达量显著升高（p<0.01）且对OMP31递呈能力显著升高（p<0.01）。实验结果表明布鲁氏菌16M抑制了IFN-γ诱导的MHCIImRNA表达水平；GFP-LC3小鼠巨噬细胞稳定表达自噬相关蛋白Atg5和Atg7，没有改变布鲁氏菌16M对MHCIImRNA的抑制作用，但解除了布鲁氏菌16M对自噬-溶酶体降解途径的阻滞作用，并且显著提高了细胞表面MHCII类分子的表达量和细胞递呈能力。2.布鲁氏菌16M感染巨噬细胞诱导非典型自噬的可能影响因素。以布鲁氏菌16M侵染小鼠巨噬细胞为实验组，

8、未做任何处理的小鼠巨噬细胞为对照组，4h、12h、24h、48h后，通过ELISA抗体双夹心方法检测小鼠巨噬细胞上清液中I