衰老对小鼠b淋巴细胞脂筏结构和功能的影响

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1、分类号：Q54学校代码：10062密级：学号：2012602010硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：衰老对小鼠B淋巴细胞脂筏结构和功能的影响TITLE:EffectsofagingonthestructureandfunctionoflipidraftsinmouseBlymphocytes一级学科：生物学二级学科：生物化学与分子生物学论文作者：李文娟指导教师：李海东教授天津医科大学研究生院二〇一五年四月分类号：Q54学校代码：10062密级：学号：2012602010学位类别：科学学位专业学位学科门类：理学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION

2、论文题目：衰老对小鼠B淋巴细胞脂筏结构和功能的影响TITLE:EffectsofagingonthestructureandfunctionoflipidraftsinmouseBlymphocytes一级学科：生物学二级学科：生物化学与分子生物学论文作者：李文娟指导教师：李海东教授天津医科大学研究生院二〇一五年四月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。

3、学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要研究目的：脂筏是膜脂双层内富含胆固醇和鞘脂的微区，目前公认的脂筏功能是参与信号转导、受体介导的内吞作用以及胆固醇代谢运输等。近年来的研究发现脂筏

4、参与了B淋巴细胞的成熟和活化过程，本文通过观察比较年轻小鼠和年老小鼠B细胞表面脂筏的表达情况，探索衰老对B细胞脂筏结构和功能的影响；并研究了体外纯化培养B淋巴细胞的适宜条件。方法：1将2-4月龄BALB/c小鼠随机分为正常年轻鼠组和高胆固醇年轻鼠组，18-24月龄BALB/c小鼠随机分为正常年老鼠组和高胆固醇年老鼠组。高胆固醇年轻鼠组和高胆固醇年老鼠组喂食高胆固醇饲料。正常年轻组和年老组小鼠给予正常饮食。2取小鼠脾脏制成单细胞悬液，染色后以流式细胞仪检测B淋巴细胞数目及亚群的变化、脂筏的表达情况、Ca2+变化水平。3用绵羊红细胞对四组小鼠进行体内免疫，以ELISA法检测B细胞分泌抗体情况及血

5、清胆固醇水平。4体外分离培养小鼠脾脏细胞，随机分为7组，分别用白细胞介素4，CD3，脂多糖，白细胞介素4+CD3，白细胞介素4+脂多糖，CD3+脂多糖组进行干预、将未给予刺激的脾细胞作为对照组。用流式细胞仪检测在不同培养条件下小鼠脾脏细胞T、B淋巴细胞及其亚群的变化结果：1、流式细胞术检测结果：⑴衰老对B淋巴细胞亚群的影响：与年轻鼠组比较，年老鼠组总外周B细胞数目保持不变；过渡(transitional,TR)B细胞亚群的T1亚群和T2亚群数目比例均显著减少（P<0.01），T3亚群数目比例增加（P<0.01）；B1细胞和滤泡（follicular,FO）B细胞数目比例并没有明显改变（P>0

6、.05），边缘带（marginalzone,MZ）B细胞数目比例下降(P<0.01)。⑵衰老对B细胞膜上脂筏表达的影响：与年轻鼠组比较，胆固醇在年老鼠组的T1、T2亚群表达显著增加（P<0.0001），差异有统计学意义；而在T3亚群胆固醇的表达却显著降低（P<0.0001），差异有统计学意义；B1亚群的胆I天津医科大学硕士学位论文固醇表达增加（P<0.001）；FO亚群胆固醇的表达无明显差异（P>0.05）；MZ亚群胆固醇的表达明显减少（P<0.0001），差异有统计学意义。而GM1的表达却有所不同，由实验结果分析知100%的B220+B细胞均表达GM1。与年轻鼠组相比，GM1在年老鼠组TR

7、、B1、FO、MZ亚群中的表达均显著降低（P<0.0001），差异有统计学意义。⑶衰老影响B细胞膜上Ca2+内流水平：与年轻鼠组比较，年老鼠组Ca2+内流水平降低。2、ELISA实验结果⑴衰老对血清中胆固醇水平的影响：与年轻鼠组相比，年老鼠组和高胆固醇年轻鼠组的血清胆固醇水平明显升高（P<0.05），差异有统计学意义；而年老鼠组的血清胆固醇水平与高胆固醇年老鼠组相比，未见明显差异（P>0.05）；高胆固醇年轻