鸡传染性贫血病毒vp1和vp2基因的表达和免疫原性研究

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1、密级：无论文编号：82110-2012-02中国兽医药品监察所硕士学位论文鸡传染性贫血病毒VP1和VP2基因的表达和免疫原性研究ExpressionofVP1andVP2GenesofChickenAnemiaVirusandStudyonImmunogenicity研究生:徐微指导教师:李慧姣研究员申请学位类别：农学硕士学科专业:预防兽医学研究方向:兽医微生物与免疫学学位授予单位：中国兽医药品监察所2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成架不包含任何他人创作的、己公开发表或者没有

2、公开发表的作品的内容，也不包含为获得中国兽医药品监察所或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。学位论文作者签名：年g月呤曰关于论文使用授权的说明本人完全了解中国兽医药品监察所有关保留、使用学位论文的规定，即：中监所有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国兽医药品监察所可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：也、氣时间：>丨厂

3、年&月导师签名：时间：年么月竓日中国兽医药品监察所硕士学位论文摘要摘要鸡传染性贫血（chickeninfectiousanemia，CIA）又称蓝翅病、出血性综合征和贫血性皮炎综合征等，是由圆环病毒科鸡传染性贫血病毒（CIAV）引起的以雏鸡再生障碍性贫血和全身性淋巴组织萎缩为主要特征的免疫抑制病。CIAV在MSB1细胞中病毒滴度较低，而通过鸡胚传代获得的病毒量也不高，使CIA灭活疫苗的生产成本很高，难以在养鸡业大量推广应用。CIAV活疫苗由于存在安全风险，也未推广应用。故近年来，基因工程疫苗研制已成为CIAV研究的重点领域之一。为探索制备鸡传染性贫血病毒重组蛋白亚单位疫苗的可行性，本研究

4、利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因进行了克隆表达，构建三组重组转移载体：pFastBacHTA-VP1及pFastBacHTA-VP2；pFastBacHTA-VP1-IRES-VP2；pFastBacDual-VP1-VP2，将它们分别转化DH10Bac感受态细胞得到相应的重组表达载体，转染昆虫细胞Sf21获得含有VP1、VP2基因的重组杆状病毒vBac-VP1、vBac-VP2、vBac-VP1-IRES-VP2、vBac-VP1-VP2，利用三组重组杆状病毒分别感染悬浮培养的Sf21细胞表达重组蛋白，即vBac-VP1与vBac-VP2共感

5、染Sf21细胞、vBac-VP1-IRES-VP2和vBac-VP1-VP2分别独立感染Sf21细胞。SDS-PAGE及Western-blot结果证明，VP1、VP2基因在昆虫细胞中得到了表达。将重组蛋白制备油乳剂灭活苗免疫SPF鸡进行蛋白免疫原性研究，动物试验进一步证实，重组蛋白免疫SPF鸡可产生高滴度的ELISA抗体，提示重组杆状病毒表达的VP1、VP2蛋白具有良好的免疫原性，其中，vBac-VP1与vBac-VP2共感染Sf21细胞和vBac-VP1-IRES-VP2独立感染Sf21细胞所表达蛋白的免疫效果接近，而vBac-VP1-VP2感染细胞所表达蛋白的免疫效果最佳。本研究为

6、CIAV亚单位疫苗的开发奠定了良好的基础，具有较好的应用前景。关键词：鸡传染性贫血病毒，VP1，VP2，杆状病毒表达，免疫原性I中国兽医药品监察所硕士学位论文ABSTRACTABSTRACTChickeninfectiousanemia（CIA）,alsoknownasbluewingdisease,hemorrhagicsyndromeandanemiadermatitissyndrome,causedbyamemberoftheCircoviridae--Chickeninfectiousanemiavirus(CIAV),isanimmunosuppressivediseasech

7、aracterizedbylymphoiddepletioninlymphatictissuesandaplasiaofthebonemarrowinyoungchickens.ThetiterofCIAVinMSB1cellsandchickenembryoislow,whichmadetheproductioncostofCIAinactivatedvaccinegreatandhardtoapplicateinthefield