鸭坦布苏病毒的分离、鉴定

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2、－、？，－一１■－■＇＊－－’＊一■、一、＇指导教师贾仁勇教授，＇；＾．４、校外导师李发明窩级兽医师？＇／争．Ｖ．、１’！＊Ｖ．ｖ；．．■．’－、、Ｖ．‘ｉ心．’－＞＊！：？学位类剔兽医硕±？’＇一＇击．．，，＊＇？＇、、域名称兽医－＾．领ｆ，Ｖ－＇，‘＇：Ｉ吝矿＾＇’：．一．？＇＂？专＾、研巧方向舍病学￣，＼．：？一？這’—、｝：；■＇，心、．Ｎ．凑，．－

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4、日车支本《（）关于论文使用授枚的声明：本人完全了解四川农业大学有关保留，学校有权保留并向国家有、使用学位论文的规定即关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。论文不保密，年解密后适用本授权。＞＾。□本论文保密在＿＿□内划＂＂（请在Ｗ上Ｖ）研巧生签名；导挪签客年如／棘ｔ叩摘要本研究从西南地区的某鸭养殖场无菌乂集有疑似坦布苏病毒（Ｔｅｍｂｕｓｕｖｉｒｕｓ，

5、ＴＭＵＶ）症状的病鸭肝脏组织，开展了下研究：疑似病毒的分离、鉴定；ＴＭＵＶ对鸭巧成纤维细胞及维鸭的致病性试验；ＴＭＵＶ的全基因组序列的扩增、遗传进化分析。主要研究内容及结果如下：１．疑似病毒的分离、鉴定：采集的病料组织经剪碎、研磨、离必、过滤除菌后，接种于９日龄健康鸭胚并收集尿囊液按照常规病毒分离方法进行盲传。该病毒在鸭胚３３－４ｄ内死亡传代过程中，自盲传至代Ｗ后，病毒液可导致鸭胚于，并致使鸭胚胚体水肿、出血，胚肝水肿、坏死。经鉴定，病毒的核酸类型为ＲＮＡ，病毒为有囊膜病毒，不耐酸，对氯仿、乙職等有机溶剂敏感，符合黄病毒

6、成员的基本生物学特征。－ＰＣＲ检测ｃｋ对收集的尿囊液经ＰＣ民或ＲＴ，其他几种常见鸭源病原如鸭瘤病毒（ＤｕｌａｕｅｖｉｍｓＤＰＶ）、鸭圆环病毒（Ｄｕｃｋｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ，ＤｕＣＶ）、（Ｄｕｃｋｐｇ，鸭乙型肝炎病毒化ｐａｔｉｔｉｓＢＶｉｒｕｓ，ＤＨＢＶ）、鸭源禽流感病毒（ＡｖｉａｎＩｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓ，ＡＩＶ）检测为阴性。根据ＴＭＵＶ－ＷＲ株ＮＳ３－ＮＳ４片段保守序列设计的特异性引物通过ＲＴ－ＰＣ民方法扩增出疑似目的条带（１２５０ｂｐ），经测序、比对后发现，与己公布的黄病毒科黄病毒属恩他耶病毒Ｉ

7、ＰＤＩＡ分离株核昔酸（ＧｅｎＢａｉｉｋＮＯ：ＮＣ０１８７０５）相似性为７２．３％，与国＿内己公布的ＴＭＵＶ分离株相比，同ＧＸ２０１３Ｈ株（ＧｅｎＢａｎｋＮＯ：ＫＪ７００４紀）相似性－．４％ｌｌＧｅ打ＢａｎｋＮＯ：ＫＦ５５７８９３）％８％。最高，为９９，同ｑ株（相似性最低，为．综一，将其命名为ＣＱＷ１上所述，我们初步分离得到株源于西南地区的鸭源坦布苏病毒。－２．ＴＭＵＶＣ１ＱＷ株对鸭胚成纤维细胞及维鸭的致病性试验；鸭胚传代至第五代病毒液为母液，，接种于单层致密的鸭胚成纤维细胞脾育，培养，观察。结果发现攻毒后２４ｈ细胞

8、开始出现圆缩，４８ｈ圆缩的细胞增多，７２ｈ细胞内空泡串联形成较大空泡，细胞脱落死亡，并