鸭坦布苏病毒病安徽株ahf10的分离鉴定及防控技术研究

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1、鸭坦布苏病毒安徽株AH．FIO的分离鉴定及防控技术研究IsolationandIdentificationofDuckTembusuvirusAH．F10StrainandItsPreventioninAnhui研究生：朱良强导师：秦爱建教授校外导师：董卫星研究员研究方向：预防兽医学资助项目：安徽省年度重点科研项目(11070303024)安徽省教育厅重点科研项目(KJ2012A124)农业部公益性农业科研专项(201003012)扬州大学二。一三年四月二日朱良强：鸭坦布苏病毒安徽株AH．F10的分离鉴定及防控技术研究鸭坦布苏病毒安徽株AH．

2、F10的分离鉴定及防控技术研究博士研究生：朱良强导师：秦爱建董卫星摘要2009年以来，安徽省及周边省市规模鸭场流行以种鸭和蛋鸭产蛋骤降并伴发死亡的疾病，疫情传播速度快，波及面广，对规模化种鸭场、蛋鸭场造成严重经济损失，安徽省宣城、安庆、池州、铜陵、巢湖、合肥、淮南、六安等主要养鸭地区疫情尤为严重。疫情发生时，鸭群的采食量迅速下降，随后产蛋率急剧下降、甚至停产并出现不同程度死亡。不同地区、不同品种的种鸭和蛋鸭群发病率20％～30％，鸭群群内发病率高达100％，病死率约为5％～10％。后备种鸭和蛋鸭发病导致开产推迟，产蛋率低；产蛋期鸭群在经过3～

3、5周的产蛋下降后，产蛋恢复过程非常缓慢，难以达到高峰。本研究从2010年起，深入疫区规模鸭场广泛收集流行病学数据，采集临床病鸭组织和血清样品进行检测，证明该病原是鸭坦布苏病毒(Ducktembusuvirus，DTMUV)是一种新发减蛋一死亡综合征的鸭传染病。本文在流行病学调查、临床学、病理学和免疫学研究的基础上，利用分离鉴定的DTMUV安徽分离株AH．F10建立了DTMUV的分子生物学诊断方法和抗原抗体琼扩试验，研制了灭活疫苗和高免卵黄抗体，初步建立了安徽规模鸭场鸭坦布苏病毒病防治技术，并在部分规模鸭场中试应用，有效地控制了安徽减蛋一死亡综

4、合征(鸭坦布苏病毒病)蔓延和流行。1、规模鸭场鸭坦布苏病毒病流行病学调查为全面了解我省规模鸭场鸭坦布苏病毒流行情况，对全省9个市、24个县的74个规模鸭场(户)的蛋鸭减蛋一死亡综合征发病情况进行了流行病学调查、临床和实验室诊断。结果表明，安徽省规模鸭场(户)的蛋鸭减蛋．死亡综合征的主要病原为鸭坦布苏病毒(DTMl『V)，群体总发病率t0．5％，病死率7．24％，产蛋率下降42．5％。用PCR方法对收集的527份病料检测，结果鸭坦布苏病毒核酸阳性504份，阳性检出率95．6％。分析结果扬州大学博士学位论文2表明，DTMUV感染、饲养管理条件差和

5、环境气候多变等是蛋鸭减蛋一死亡综合征多发的重要诱因。2、鸭坦布苏病毒安徽AH—F10株的分离鉴定本试验从安徽规模鸭场临床表现为产蛋突然降低的鸭群，无菌采集肝、脾、胰腺、卵泡、输卵管、卵巢、血液、淋巴结、和肾脏等病料，分别接种10臼龄SPF鸡胚进行病原分离，经SPF传代、PCR鉴定和基因序列分析等鉴定，结果获得1株DTMUV。对分离到的病毒命名为安徽AH．F10，致病性试验和特性检测结果表明，该株病毒对鸡胚的半数致死量(ELD50)为10之67／0．2mL，鸭胚的半数致死量(ELD50)为103‘05／0．2mL，该病毒在pH7．2的条件下不能

6、凝集鸭、鸡的红细胞，不能在鸡胚成纤维细胞生长，但能在鸭胚成纤维细胞生长。RT-PCR扩增和序列分析结果证明，该病毒与中国各地引起鸭产蛋下降综合征的新型鸭坦布苏病毒的同源性达到96—99％。3、安徽AH．F10株DTMUV的致病性研究为进一步弄清DTMUV的致病性，本研究对安徽分离株AH—F10进行动物致病性试验。结果表明，用每只103。05个ELD50的AH．F10病毒颈部肌肉注射28周龄高产蛋鸭，鸭呈现采食量下降，随后产蛋量下降并逐渐停止，而未攻毒对照组鸭表现正常。病理检测发现，攻毒鸭可见明显的卵巢变性、变形和萎缩，而对照组鸭表现正常，剖检

7、无明显病变。用同样剂量攻击雏鸭，结果雏鸭出现精神不振，蜷缩，流涎，减食，粪便稀薄，呈绿色水样便，严重的双腿向后伸张，站立不起，解剖见脑膜出血，肝脏出血肿大，胰腺有出血，肠道肿大。这些结果表明，本研究分离到的DTMUV安徽分离株AH．F10不仅对产蛋鸭致病，而且对雏鸭有明显的致病作用，并能够引起雏鸭死亡。4、琼脂扩散试验检测鸭坦布苏病毒及抗体方法的建立本研究用浓缩DTMUV安徽AH—F10株抗原免疫新西兰大白兔，制备抗鸭坦布苏病毒高免血清，以浓缩的病毒与抗鸭坦布苏病毒血清抗体进行琼脂扩散试验。结果表明，以1／15MpH7．2PBS配制的含O．8

8、5％琼脂糖凝胶进行琼扩试验，抗原抗体反应效果最好。用鸭坦布苏病毒AH．F10株提纯抗原和兔抗AH．F10抗体效价均能达到1：32。用该血清琼扩试验检测感染鸭心、脾、