microrna-99a在肾细胞癌中的表达及作用机制

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1、SOOCHOWUNIVERSITY博士专业学位论文论文题目Micr〇RNA-99a在肾细胞癌中的表达及作用机制研究生姓名崔笠指导教师姓名何小舟专业名称泌尿外科学研究方向泌尿系肿瘤的诊断和治疗论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体

2、，均已在文中以明确方式标明《»本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：叙日期：„2漕苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位

3、论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年月解密后适用本规定。非涉密论文d日期:U!i.tkU日期:MicroRNA-99a在肾细胞癌中的表达及作用机制中文摘要MicroRNA-99a在肾细胞癌中的表达及作用机制中文摘要中文摘要中文摘要肾细胞癌（renalcellcarcinoma，RCC）在泌尿系统中是最为常见的恶性肿瘤之一，它的生物学活动极其复杂多变，发生发展及转移的分子机制至今仍不明确。近年来的研究发现微小RNA-99a（miR-99a）在舌鳞状细胞癌、浆膜卵巢

4、癌、肝癌、鳞状细胞肺癌、前列腺癌、膀胱癌及儿童肾上腺皮质肿瘤等多种肿瘤中的表达水平均下调，并且对这些肿瘤的生长有明显的抑制作用，预示着miR-99a可能作为潜在的肿瘤抑制因子用于肿瘤的诊断与治疗。基于目前尚未有miR-99a在肾癌中的研究报道，本研究在肾癌组织标本及肾癌细胞中检测miR-99a的表达水平，分析miR-99a表达与预后的相关性，通过体外及体内实验研究miR-99a对肾癌细胞功能及肿瘤进展的影响，检测相关信号通路，进一步探讨可能的作用机制，以期给肾癌的诊断和治疗带来新的思路。第一部分

5、miR-99a在肾癌中的表达及临床意义目的目的：目的：：：探讨肾癌细胞系、肾癌组织及相应癌旁组织中miR-99a的表达，并分析与临床特征的关系，探讨肾细胞癌患者的临床预后的关系。方法方法：方法：：：采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（quantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction，qRT–PCR）检测肾小管上皮细胞株HK-2、肾癌细胞株786-0、肾癌细胞株OS-RC-2以及40例肾癌组织和相应癌旁组织的miR-99a的表达水平，并对

6、其进行比较和相关分析。结果结果：结果：：：qRT-PCR结果显示786-0及OS-RC-2中miR-99a表达明显低于HK-2，相对于癌旁组织，肾癌标本中miR-99a表达明显下调。Kaplan-Meier分析显示，miR-99a表达水平降低的患者生存期显著缩短。结论结论：结论：：：miR-99a在肾癌组织和细胞中明显低表达，miR-99a表达水平下降的患者生存期明显缩短，提示miR-99a可能成为肾癌诊断及预后的新标志物。I中文摘要MicroRNA-99a在肾细胞癌中的表达及作用机制第二部分m

7、iR-99a对肾癌细胞功能及肿瘤进展的影响目的目的：目的：：：通过细胞功能实验及裸鼠成瘤模型研究miR-99a对肾癌细胞功能及肿瘤进展的影响。方法方法：方法：：：应用合成的miR-99a模拟物转染786-0及OS-RC-2，采用细胞增值检测、克隆形成检测、迁移检测、侵袭检测、流式细胞检测，观察上调miR-99a表达对肾癌细胞功能及细胞周期的影响。裸鼠皮下注射786-0成瘤后再次注射miR-99a模拟物，观察上调miR-99a表达对裸鼠成瘤的影响。结果结果：结果：：：细胞功能实验表明转染miR-9

8、9a模拟物可对肾癌细胞的增殖、存活、迁移、侵袭起到抑制作用，并诱导细胞周期G1期的阻滞，动物实验显示注射miR-99a模拟物后肿瘤生长明显受抑制。结论结论：结论：：：miR-99a高表达可明显抑制肾癌细胞功能及肿瘤进展，提示miR-99a可能成为治疗肾癌的有效调节靶点。第三部分miR-99a调控肾癌进展相关信号通路的机制研究目的目的：目的：：：检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamycin，mTOR）及其通路下游相关因子在肾细胞癌中受到miR-99a调控后的表达