基于核酸酶的高灵敏度和高选择性的铀的生物传感方法研究

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3、委员２：若若ＩＬ若如麟辦分委员３：ｍ委员４：名走制教始荷木＾Ｓ委员；委员６；答辩日期：作年ｔ月ｒ日［本人南华大学学位论文原创性声明声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得包的含研其究成他人果己。尽经我发表所知或撰，写除过了论文中特别加１＾标注和致谢的地方外，论文中不位的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单已在的论学位文或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研巧所作的贡献均中作了明确的说明。本人完作全者意签识到本声明

4、的法律结果由本人承担。名：Ｉ錫：月郑曰挪Ｊ年Ｊ本南华大学学位论文版巧使用授权书下学位论文是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导得完成的学位论文。本论文的研巧成果归南华大学所有，本论文的研究内容不心斗其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，论艮Ｐ文：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可公布学位可根据的全部或部分内容，可Ｗ采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校优秀博硕国±家或学湖位论南省文全有文关部口规定送交学位论

5、文。同意学校将论文加入《中国数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库文出版收录章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论对于涉密到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向化会公众提供信息服务。的学位论文，解密后适用该授权。作剧者签名；Ｉ轉兴Ｋ年Ｊ月＊老曰币輪令０＾如巧厂月骗基于核酸酶的高灵敏度和高选择性的铀的生物传感方法研究摘要：铀作为核工业发展的主要原材料，在利用过程中会带来放射性核素污染问题，由此带来的危害主要表现在两个方面：化学毒性和辐射

6、毒性。化学毒性表现在对肾脏、免疫系统、神经系统、生殖生育等影响，辐射毒性则是DNA致突和致癌作用。铀的现行检测方法中，存在检测仪器昂贵，或是检测限高、干扰较大等问题。所以，建立简便、选择性好、灵敏度高的检测方法对于环境中铀污染物的有效监测、防患于未然是极其重要的。本文第二章建立了核酸外切酶III辅助底物碎片循环信号放大超灵敏检测铀酰离子的新方法。铀酰离子能特异性地与DNA酶作用，诱导DNA酶的构象发生变化，释放出ssDNA。加入MB之后，游离出的ssDNA与分子信标杂交形成双链，加入ExoⅢ后，外切酶Ⅲ对

7、特定识别位点进行剪切，打开的MB被剪切为单个碱基，而ssDNA不被剪切并与下一个MB杂交，引起二次循环裂解，导致荧光信号积聚，经过多次循环，可使荧光信号放大。在优化出的最佳实验条-12-11件下，铀酰离子浓度范围为8.1×10mol/L~9.5×10mol/L时，体系的荧光变化值呈现较好的线性关系，线性回归方程为ΔF=162.3c-11（10mol/L）+22.01，相关系数r=0.990。根据空白管的标准偏差Sb和标准曲线的斜率k算出LOD为2.4pM。该方法选择性好，灵敏度高于迄今为止已报道的方法。本

8、文第三章建立了非标记DNAzyme构象改变荧光法检测铀酰I离子的新方法。实验表明，在pH5.5MES缓冲溶液中，当体系中不存在铀酰离子时，SYBRGreenⅠ(SG)能通过嵌入和小沟结合方式与脱氧核酶作用，导致荧光增强；当铀酰离子存在时，DNAzyme的rA碱基处断裂，游离出单链，此时SG与单链DNA作用减弱，荧光信–9号降低，且体系的荧光强度变化值与铀酰离子浓度在1.73×10～–84.40×10mol/L范围内呈良好线性关